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产品简介
模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧气化酶反应系统，产生超氧阴离子自由基，加入电子传递物质及显色剂，使反应体系呈现紫红色，可利用分光光度计测其吸光度。当抗超氧阴离子的物质，例如：白细胞、有些抗肿瘤的药物，可增加此反应，使超氧阴离子自由基增加，故比色时颜色变深。依据形成物的颜色深浅计算出抑制或产生超氧阴离子自由基的能力强弱。当被测样本中含有超氧阴离子自由基抑制剂时，则比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度，而如果被测样本中含有产生超氧阴离子自由基物质时，则比色时测定管的吸光度高于对照管的吸光度，通过以维生素C做标准，可计算出被检物品对超氧阴离子自由基的影响能力。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
组分规格 |
储存条件 |
|
60744-A |
试剂一 |
5 mL×1 |
2~8℃，天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需 37℃水浴溶解后再用；用时按1：9 的比例加ddH2O混合配成试剂一应用液，2~8℃保存 |
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60744-B |
试剂二 |
5 mL×1 |
2~8℃ |
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60744-C |
试剂三 |
5 mL×1 |
2~8℃ |
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60744-D |
试剂四 |
350 μL×1 |
-25~-15℃，用时按试剂四：试剂五=1：14比例配制成试剂四应用液，置冰上备用，现配现用 |
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60744-E |
试剂五 |
5 mL×1 |
2~8℃ |
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60744-F |
试剂六 |
1 vial |
2~8℃，粉末，用时加ddH2O 37.5 mL加热至 70-80℃溶解，配好后2~8℃避光保存 |
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60744-G |
试剂七 |
1 vial |
2~8℃，粉末，用时加ddH2O 37.5 mL溶解后备用，配好后的试剂2~8℃避光保存 |
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60744-H |
标准品 |
1 vial×4 |
2~8℃，用时将一支Vc标准品加ddH2O定容至5 mL（标准品配制后当天内使用）配成Vc标准贮备液，再取1 mL该贮备液加4 mL ddH2O（5倍稀释）配成 0.15 mg/mL Vc标准品应用液，现配现用。Vc 标准品配置后见光极易分解，配制好的标准品应用液需在30 min内检测 |
储存条件
2~8℃避光保存，有效期6个月。部分产品需置于-25~-15℃保存，部分产品需现配现用，部分产品需避光，请严格按照说明进行。
使用说明
- 样本前处理
- 血清(血浆)样本：（采血时必须避免溶血）血清（血浆）直接使用，样本2~8℃存放最好当天检测，如来不及可放0℃以下冷冻保存，温度越低存放时间越长。
- 组织样本：准确称取待测组织的重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9 的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%的组织匀浆，2500 rpm，离心10 min，取上清液进行测定。(取部分上清液测定蛋白浓度)
- 细胞样本：
- 细胞收集：贴壁胰酶消化或细胞刮刮下，转移到离心管中1000-2000 rpm，离心5分钟后弃上清，取沉淀，悬浮细胞直接离心收集沉淀。
- 细胞破碎，加 0.5-1 mL的PBS（推荐Cat# 60152）清洗1-2次，同上1000-2000 rpm，离心收集沉淀细胞，再加入 0.3-0.5 mL 0.1M PH 7.4的等渗PBS缓冲液悬浮细胞，冰水浴条件下超声破碎（功率300W，3~5 s/次，间隔30 s,重复3~5次）或手动研磨破碎细胞，取破碎后的细胞悬液待测。
【注】若悬液有明显颗粒物或絮状物，可2000 rpm，离心10 min后取上清使用。
- 操作表
表1 加样方法
|
加样种类 |
对照管 |
标准管 |
测定管 |
|
试剂一应用液（mL） |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
ddH2O（mL） |
0.05 |
/ |
/ |
|
0.15 mg/mL Vc标准品应用液（mL） |
/ |
0.05 |
/ |
|
样品（mL） |
/ |
/ |
0.05 |
|
试剂二（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
试剂三（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
试剂四应用液（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
用旋涡混匀器充分混匀，37℃恒温水浴40 min |
|||
|
显色剂（mL）：按照试剂六溶液︰试剂七溶液︰冰乙酸=3 ︰3︰2 的体积比配置，2~8℃避光保存 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
|
混匀，室温静置10 min，倒入1 cm光径比色杯中，ddH2O调零，波长550 nm处比色 |
|||
【注】最佳取样浓度：因反应体系中在规定的底物浓度下，抗各种物质抗O2 -能力不一样，根据朗伯—比耳定律，样本浓度不可太大也不可太小，否则影响结果。因此在正式实验前必须做预实验以确定最佳取样浓度。
- 计算公式（因各种物质不同，则定义及计算公式也不一样，具体如下：）
- 血清（血浆）等液体样本计算公式
a. 定义：在反应系统中，每升血清（血浆）或液体样本在37℃反应40 min所抑制的超氧阴离子自由基相当于1 mg的维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位U。
b. 计算公式：
C标准：标准品浓度，0.15 mg/mL；1000：单位换算，mL→L；
- 组织、细胞计算公式
a. 定义：在反应系统中，每克组织（细胞）蛋白在37℃反应40 min所抑制的超氧阴离子自由基相当于1 mg的维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位U。
b. 计算公式：
C标准：标准品浓度，0.15 mg/mL；1000：单位换算，mL→L；Cpr：相应组织样本浓度下的蛋白浓度，prot指蛋白；
- 本品尚可检测产生超氧阴离子的改变，例如白细胞，某些中西药物等，其计算公式如下：
a. 定义：在反应系统中，每升（克）物质在37℃反应40 min所产生的超氧阴离子自由基相当于1 mg的维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。
b. 计算公式一：
计算公式二：
W：样本重量（g），V提：提取液的总体积（L）；
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 因反应体系中在规定的底物浓度下，各种物质抗O2 -能力不一样，取样浓度不可太大或太小，否则影响结果。因此在正式实验前必须做预实验以确定最佳取样浓度。预实验后再进行批量实验，否则由此导致的后果用户自行承担。
附录Ⅰ：Vc标准曲线的配置
1. 前处理：取Vc标准品一支，用ddH2O配制成不同浓度的标准应用液待测。
2. 操作表
表2 加样方法
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加样种类 |
对照管 |
标准管 |
|
试剂一应用液（mL） |
1.0 |
1.0 |
|
ddH2O（mL） |
0.05 |
/ |
|
0.15 mg/mL Vc标准品应用液（mL） |
/ |
0.05 |
|
试剂二（mL） |
0.1 |
0.1 |
|
试剂三（mL） |
0.1 |
0.1 |
|
试剂四应用液（mL） |
0.1 |
0.1 |
|
用旋涡混匀器充分混匀，37℃恒温水浴40 min |
||
|
显色剂（mL）：按照试剂六溶液︰试剂七溶液︰冰乙酸=3 ︰3︰2 的体积比配置，2~8℃避光保存 |
2.0 |
2.0 |
|
混匀，室温静置10 min，倒入1 cm光径比色杯中，ddH2O调零，波长550 nm处比色 |
||
3. 结果处理
可选取Vc标准品浓度（mg/mL）为横坐标，抑制率（100%）为纵坐标作线性图（标准曲线），也可不做标准曲线，直接套用计算公式计算即可，结果无影响。
附录Ⅱ：脂血样本的测定
1. 操作表
表3 加样方法
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加样种类 |
对照管 |
标准管 |
测定管 |
测定空白管 |
|
试剂一应用液（mL） |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
ddH2O（mL） |
0.05 |
/ |
/ |
/ |
|
0.15 mg/mL Vc标准品应用液（mL） |
/ |
0.05 |
/ |
/ |
|
样品（mL） |
/ |
/ |
0.05 |
/ |
|
试剂二（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
试剂三（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
试剂四应用液（mL） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
用旋涡混匀器充分混匀，37℃恒温水浴40 min |
|
|||
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显色剂（mL）：按照试剂六溶液︰试剂七溶液︰冰乙酸=3 ︰3︰2 的体积比配置，2~8℃避光保存 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
|
样本（mL） |
/ |
/ |
/ |
0.05 |
|
三氯甲烷（mL） |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
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混匀，3500 rpm离心10 min，取上清，倒入1 cm光径比色杯中，ddH2O调零，波长550 nm处比色 |
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2. 结果处理
C标准：标准品浓度，0.15 mg/mL；1000：单位换算，mL→L；
【注】1. 一般的含脂类的标本都可以按照这个操作表操作，排除脂类对测定的干扰。2. 三氯甲烷需自备，并且对于一些重度高脂，有可能会出现加完与样本等量的氯仿后上清还是浑浊，这时需要加大氯仿的量，再次混匀离心至上清澄清。
Ver.CN20240827
