产品简介

 

抗氧化能力的强弱与健康状态存在着密切联系，机体防御体系有酶促与非酶促两个体系，许多酶是以微量元素为活性中心，例如：超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽S-转移酶等，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质等。抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总水平可体现体系内的总抗氧化能力，因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。

该试剂盒用于测定样本中的总抗氧化能力（T-AOC），适用于血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织裂解液、植物或中草药提取物以及各种抗氧化物溶液，作用原理基于机体中有许多抗氧化物质，能使Fe³⁺还原成Fe²⁺，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	规格	储存条件	备注
60742-A	试剂一	60 mL	2～8℃	Part 1
60742-B	试剂二	粉剂×1支	2～8℃
60742-C	试剂三	3 mL+30 mL	2～8℃，避光保存
60742-D	试剂四	12 mL	室温	Part 2
60742-E	试剂五	12 mL	室温，如凝固，需溶解至澄清透亮后使用

 

储存条件

 

2～8℃避光保存，有效期6个月。

 

使用说明

 

【注：正式测定前建议取2-3个预期差异较大的样本做预测定，且本试剂盒不建议使用酶标仪读数。】

1 准备仪器与试剂

分光光度计（520 nm）、1 cm光径比色皿、37℃恒温水浴锅、台式低速离心机、移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1 M）、涡旋混匀器、离心管。

2 试剂的前处理

1）试剂二的处理：加双蒸水120 mL充分溶解，如需加快溶解，可以在37℃水浴溶解，配成试剂二应用液。

2）试剂三的处理：3 mL的贮备液与30 mL的稀释液按1:9的比例，现用现配，配成试剂三应用液。

3 样品的前处理

1)血浆样本的前处理

血浆在测试前3500转／分，离心10分钟，取上清待测；肝素抗凝的血浆、血清不需要离心。

2）组织样本的前处理

准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的匀浆液，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测（同时需要测定匀浆蛋白浓度，推荐使用20202ES）。

3）细胞样本的前处理

将培养细胞消化，离心，弃上清，留下层细胞，用生理盐水或匀浆介质制备成10⁷/cm³的悬液，即10⁷/mL的悬液，再进行破碎，制备好的细胞悬液不需要离心，在测试加样前要摇匀后取样。【破碎细胞的方法：①匀浆器匀浆。②超声粉碎器粉碎。③反复冻溶3次。】

4）培养细胞的上清及部分体液均可以按照血清样本处理，一般直接加样。

5）全血样本前处理：一般用双蒸水10倍稀释。

4 操作步骤

1)调节波长：分光光度计（比色测定波长为520 nm）。

2)血清(浆)中T-AOC的测定

试剂	测定管（mL）	对照管（mL）
试剂一	1.0	1.0
血清(浆)	0.1
试剂二应用液	2.0	2.0
试剂三应用液	0.5	0.5
旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂五	0.1	0.1
血清(浆)		0.1
混匀，25～37℃放置10分钟，波长520 nm，1 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

单位定义及计算公式：

定义：在37℃时，每分钟每毫升血清（浆）使反应体系的吸光度（OD）值每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位（U）。

计算公式：

总抗氧化能力（U/mL）=(A测定-A对照）÷0.01÷T x V反总÷V样 x N

T：反应时间，30 min；V反总：反应体系总体积，mL；V样：取样量，mL；N：样本测试前稀释倍数。

3)组织中T-AOC的测定

试剂	测定管（mL）	对照管（mL）
试剂一	1.0	1.0
待测样本	10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2 mL
试剂二应用液	2.0	2.0
试剂三应用液	0.5	0.5
旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂四	0.2	0.2
待测样本		10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2 mL
试剂五	0.2	0.2
混匀，25～37℃放置10分钟，波长520 nm，1 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

定义：在37℃时，每分钟每毫克组织蛋白，使反应体系的吸光度（OD）值，每增加0.01时， 为一个总抗氧化能力单位（U）。 计算公式：

总抗氧化能力（U/mgprot）=(A测定-A对照）÷0.01÷T x V反总÷V样 ÷ Cpr

T：反应时间，30 min；V反总：反应体系总体积，mL；V样：取样量，mL；Cpr：组织匀浆蛋白浓度，mgprot/mL(prot指蛋白)。

4)全血中T-AOC的测定

试剂	测定管（mL）	对照管（mL）
试剂一	1.0	1.0
待测样本	0.05
试剂二应用液	2.0	2.0
试剂三应用液	0.5	0.5
旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂四	0.1	0.1
待测样本		0.05
混匀，25～37℃放置10分钟，波长520 nm，1 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

定义：在37℃时，每分钟每毫升全血，使反应体系的吸光度（OD）值每增加0.01时，为一 个总抗氧化能力单位（U）。

计算公式：

总抗氧化能力（U/mL）=(A测定-A对照）÷0.01÷T x V反总÷V样 x N

T：反应时间，30 min；V反总：反应体系总体积，mL；V样：取样量，mL；N：样本测试前稀释倍数。

5）简单操作法

a混合试剂的配制：试剂一:试剂二:试剂三＝1:2:0.5的比例进行配制，现用现配(最好配完即用，剩余的丢弃)

b血清（浆）、全血简便操作表：

试剂	对照管（mL）	测定管（mL）
待测样本		0.1
混合试剂	3.5	3.5
旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂四	0.1	0.1
待测样本	0.1
混匀，25～37℃放置10分钟，波长520 nm，1 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

c组织样本简便操作表：

试剂	对照管（mL）	测定管（mL）
组织匀浆		10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2 mL
混合试剂	3.5	3.5
旋涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂四	0.2	0.2
组织匀浆	10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2 mL
试剂五	0.2	0.2
混匀，25～37℃放置10分钟，波长520 nm，1 cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

 

注意事项

 

1. 不建议使用酶标仪读数。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20241104