产品简介

 

过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧化代谢的副产物，在许多氧化应急反应中过氧化氢都是一种关键的调节因子。过氧化氢作为一种活性氧物质，能够触发包括NF-kappaB在内的多种信号转导途径的激活，这些信号通路与多种疾病的发生发展有着紧密的联系，如哮喘、炎症性关节炎、动脉硬化和神经退行性疾病等，过氧化氢也和细胞凋亡、细胞增殖等密切相关。

该试剂盒可以测定动物组织、血清、血浆、其它生物体液、细胞、植物组织等的过氧化氢浓度，其原理是过氧化氢（H₂O₂）可以与钼酸作用生成一种络合物，405 nm处测根据其生成量可计算出H₂O₂的量。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	规格	储存条件
60743-A	试剂一	60 mL	2～8℃
60743-B	试剂二	60 mL	2～8℃，如有结晶，热水溶解后使用。
60743-C	H2O2标准品	5 mL	2～8℃

 

储存条件

 

2～8℃避光保存，有效期6个月。

 

使用说明

 

【注：正式测定前建议取2-3个预期差异较大的样本做预测定。若吸光度大于0.8需要稀释样本，若吸光度小于0.05需要增加取样量，对应标准管中的标准品与空白管中的双蒸水均要同样量增加，但是标准品要作相应稀释后再增加量】

1 准备仪器

分光光度计或酶标仪(405 nm)、台式离心机、移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1M）、涡旋混匀器。

2 试剂的前处理

H₂O₂标准品︰双蒸水按1︰9的比例配成163 mmol/L H₂O₂标准品溶液，现用现配。

3 样品的前处理

1）血清/血浆等液体样本可直接测定，如超过线性范围可稀释后测定；细胞培养液则吸取部分，8000转/分，离心5分钟后取上清液检测。

2）动物组织样本的前处理

准确称取组织重量，按重量（g）：体积（mL）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，12000转/分，离心10分钟，取上清液待测（上清液需要测定其蛋白浓度，推荐使用20200ES/20201ES）。

3. 细胞样本的前处理

收集细胞后，每份细胞（细胞数量尽量不要低于 10⁶个，越多越好）加入0.3 mL的生理盐水（或者PBS 41403ES），冰水浴下超声破碎（200-300 W，运行5秒，间隔15秒，反复3-5次），12000转/分，离心10分钟，取上清液待测（上清液需要测定其蛋白浓度，推荐使用20200ES/20201ES）。

4）植物/药材样本的前处理

水分含量较高的植物建议用方法二，水分含量低建议用方法一处理。

方法一

将植物组织用PBS擦洗干净后用吸水纸吸干，剪碎放入研钵，加液氮研磨成粉，称取植物粉末，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的PBS（41403ES），涡旋震荡或研磨仪研磨1分钟，12000转/分，离心10分钟，取上清液待测。

方法二

植物组织用PBS擦洗干净后用吸水纸吸干，不研磨成粉，按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的PBS（41403ES），冰水浴条件下机械匀浆，12000转/分，离心10 分钟，取上清液待测。

4 操作步骤

1）调节波长：分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为405 nm）。

2）按操作表依次加入各试剂。

试剂	空白管（mL）	标准管（mL）	测定管（mL）
试剂一	1.0	1.0	1.0
双蒸水	0.1
163 mmol/L H2O2标准品		0.1
样本			0.1
试剂二	1.0	1.0	1.0
混匀，于405 nm处，1 cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值A。

5 计算公式

1)液体样本计算公式

H₂O₂(mmol/L)=(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)x C标准x N

C标准：标准液浓度163 mmol/L；N：样本测试前稀释倍数。

2)动物组织/细胞样本计算公式

H₂O₂(mmol/gprot)=(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)x C标准÷ Cpr

Cpr：组织匀浆蛋白浓度，gprot/L（prot指蛋白）

3)组织中样本计算公式

H₂O₂(mmol/g鲜重)=(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)x C标准÷（W÷V样总）

W：组织样本质量，g；V样总：样本前处理（匀浆）时，加入的匀浆介质的体积，L。

 

注意事项

 

1. 有些样本因其本身带有一定的颜色或者浊度，需在操作表的基础上加测一个样本的对照管（即0.1 mL样本+2 mLPBS，混合后405 nm处读数，计算时A测定先减去A对照，再代入计算）。
2. 细胞中过氧化氢较低，建议细胞数越多越好（最低不低于10⁶个）。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20240829