产品简介

 

本产品适用于从动物组织（肝脏、肾脏、脾脏等）中提取总RNA。采用独特的磁珠及精心优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，提取的核酸适用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译等实验。本产品配合自动化核酸提取仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

 

组分信息

 

类别	组分编号	组分名称	规格
			18605ES20	18605ES50	18605ES60
Part Ⅰ	18605-A	裂解液	10 mL	25 mL	50 mL
	18605-B	结合液	12 mL	30 mL	60 mL
	18605-C	洗涤液A	14 mL	35 mL	70 mL
	18605-D	洗涤液B	10 mL	24 mL	48 mL
	18605-E	洗脱液	1 mL x 2	5 mL	10 mL
	18605-F	磁珠悬浮液	0.4 mL	1 mL	1 mL x 2
Part Ⅱ	18605-G	DNase I	60 μL	150 μL	300 μL
	18605-H	DNase I Reaction Buffer (10×)	0.2 mL	0.5 mL	1 mL
	18605-I	PT液	90 μL	225 μL	450 μL

 

储存条件 

 

Part I组分室温保存，有效期1年。

Part II 组分-25～-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1. 洗涤液B在使用前请按照标签说明加入对应无水乙醇。
2. 操作前请在裂解液中加入PT液至终浓度为1%，如1 mL裂解液中加入10 μL PT液，配制完成后可在4℃保存一周。
3. PT液在-20℃中为冷冻状态，室温溶解后会有微量结晶，可涡旋混匀，待试剂完全溶解后使用。

样本前处理

      1.组织样本：在离心管中加入450 μL裂解液（确认已加入PT液），使用液氮将样本研磨成粉末状，称取10-15mg 样本加入裂解液中，涡旋混匀，如有沉淀可使用移液枪进行吹打，室温静止5 min，得到前处理样本。

      2.悬浮细胞样本：取不超过500万细胞样本，低速离心去除上清。在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到前处理样本。

      3.贴壁细胞样本：使用胰酶将贴壁细胞进行消化并低速离心去除上清，在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到前处理样本。若细胞量小于1×10⁶，可直接去除孔板内培养基，向其中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到前处理样本。

一、手动提取步骤

1. 在前处理样本中加入550 μL结合液，涡旋5s混匀。
2. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋5s混匀，置于室温旋转仪或涡旋仪混匀5 min。
3. 孵育结束后短暂离心，将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
4. 向离心管中加入700 μL洗涤液A，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
5. 向离心管中加入700 μL洗涤液B（请确认洗涤液B是否已添加无水乙醇），充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
6. 短暂离心弃去残留液体，置于磁力架中开盖室温晾干5 min，确保磁珠无乙醇残留。
7. DNA酶消化液配制（需提前配制，避免第6步磁珠过分晾干）：

a常规样本，如肝脏，肾脏，脾脏和心脏等样本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87 μL DEPC水，轻柔吹打混匀，配制完成后的消化液可短暂存放于4℃（不超过30 min）。

b微量样本，如微量脑组织：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7 μL DEPC水，轻柔吹打混匀，配制完成后的消化液可短暂存放于4℃（不超过30 min）。

8. 向离心管中加入100μL DNA酶消化液，轻柔颠倒或吹打使磁珠分散，室温放置15 min，每隔5 min颠倒混匀1次。
9. 向离心管中加入700 μL洗涤液B，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
10. 重复步骤9。
11. 瞬离吸干净残留液体，置于磁力架中开盖室温放置5min使乙醇充分挥发，观察到磁珠表面无液体或刚出现龟裂即可。（注：磁珠不能过度干燥，过度干燥会导致洗脱效率下降。若室温过低可适当延长晾干时间。）
12. 向离心管中加入50-100 μL洗脱液，置于恒温震荡仪中，60℃ 1600 rpm震荡混匀5 min。将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，将洗脱液转移至无RNA酶的离心管中，注意不要吸到磁珠。核酸溶液保存于-80℃。

 

二、搭配AP-96N 核酸提取仪自动化提取步骤

1. 按如下方式添加试剂，添加试剂前请确认洗涤液B是否已添加无水乙醇，DNA酶消化液为现用现配，请参照手提步骤7进行配制：
2. 按照样本前处理步骤进行操作得到前处理样本，将其加入板位1，吹打2-3次混匀。
3. 将96 磁棒套正确放入核酸提取仪器的磁棒架中，并将添加好试剂的各96 孔板正确安放至核酸提取仪器中。
4. 按照下表进行程序设置并启动运行。程序结束后，洗脱板中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将其转移至干净的RNase-free离心管中，置于-80℃保存。

板位	试剂
板位1	结合板，550 μL结合液
板位2	洗涤A板，每孔添加700 μL洗涤液A
板位3	磁珠板，每孔添加700 μL洗涤液B，20 μL磁珠悬浮液
板位4	DNA酶消化板，DNA酶消化液 100 μL
板位5	洗涤B板，每孔添加700 μL洗涤液B
板位6	洗脱板，每孔添加50-100 μL洗脱液

AP-96N自动核酸提取仪的提取程序

步骤	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步	第8步	第9步
工 位	3	1	2	3	4	5	6	6	3
等待时间	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:05:00	00:00:00	00:03:00	00:00:00	00:00:00
混合模式	2	1	2	2	3	2	2	2	2
混合时间	00:00:20	00:05:00	00:02:00	00:02:00	00:15:00	00:02:00	00:05:00	00:00:00	00:00:10
是否暂停	否	否	否	否	否	否	否	否	否
吸磁时间	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:00:45	00:00:00
体 积	700	1000	700	700	100	700	100	100	700
温 度	--	25	--	--	--	--	65	65	--

混合模式1：混合速度200000，混合时间10s;

混合模式2：混合速度300000，混合时间10s;

混合模式3：混合速度50，混合时间10s。

 

三、搭配AP-48N 核酸提取仪自动化提取步骤

1. 按如下方式添加试剂，添加试剂前请确认洗涤液B是否已添加无水乙醇，DNA酶消化液为现用现配，请参照手提步骤7进行配制：
2. 按照样本前处理步骤进行操作得到前处理样本，将其加入孔位1/7列，吹打2-3次混匀。
3. 将8联磁棒套正确放入核酸提取仪器的磁棒架中，并将添加好试剂的96 孔板正确安放至核酸提取仪器中。
4. 请按照下表进行程序设置并启动运行。程序结束后，洗脱孔（第5、11列）中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将其转移至干净的RNase-free离心管中，置于-80℃保存。

孔位	试剂
孔位1/7列	每孔添加550 μL结合液
孔位2/8列	每孔添加700 μL洗涤液A
孔位3/9列	每孔添加700 μL洗涤液B，20 μL磁珠悬浮液
孔位4/10列	DNA酶消化液 100 μL
孔位5/11列	每孔添加50-100 μL洗脱液
板位6/12列	每孔添加700 μL洗涤液B

 

AP-48N自动核酸提取仪提取程序

步骤	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步	第8步	第9步
孔 位	3	1	2	3	4	6	5	5	3
等待时间	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:05:00	00:00:00	00:03:00	00:00:00	00:00:00
混合模式	2	1	2	2	3	2	2	2	2
混合时间	00:00:20	00:05:00	00:02:00	00:02:00	00:15:00	00:02:00	00:05:00	00:00:00	00:00:10
是否暂停	否	否	否	否	否	否	否	否	否
吸磁时间	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:00:45	00:00:00
体 积	700	1000	700	700	100	700	100	100	700
温 度	--	25	--	--	--	--	65	65	--

混合模式1：混合速度200000，混合时间10s；

混合模式2：混合速度300000，混合时间10s；

混合模式3：混合速度50，混合时间10s。

四、搭配AP-16S 核酸提取仪自动化提取步骤

1. 按照48通道加液方式在96深孔板中添加试剂。
2. 按照样本前处理步骤进行操作得到前处理样本，将其加入孔位1/7列，吹打2-3次混匀。
3. 将8联磁棒套正确放入核酸提取仪器的磁棒架中，并将添加好试剂的96 孔深孔板正确安放至核酸提取仪器中。
4. 按照下表进行程序设置并启动运行。程序结束后，洗脱孔（第5、11列）中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将其转移至干净的RNase-free离心管中，置于-80℃保存。

AP-16S自动核酸提取仪提取程序

步骤	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步	第8步	第9步
工 位	3	1	2	3	4	6	5	5	3
等待时间	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:05:00	00:00:00	00:03:00	00:00:00	00:00:00
混合模式	3	2	3	3	5	3	3	3	3
混合时间	00:00:20	00:05:00	00:02:00	00:02:00	00:15:00	00:02:00	00:05:00	00:00:00	00:00:10
是否暂停	否	否	否	否	否	否	否	否	否
吸磁时间	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:00:45	00:00:00
体 积	700	1000	700	700	100	700	100	100	700
温 度	--	25	--	--	--	--	65	65	--

 

注意事项

 

1. 各组分如有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可45℃加热至溶液澄清。

2. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。

3. 冻存样品避免反复冻融，否则会导致样品中核酸的质量下降。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

 

 

Ver.CN20240924