产品简介

重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，其氨基酸序列与牛源肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（DDDDK），可用于去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，保障重组融合蛋白准确的N端序列，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣酵母表达重组肠激酶（His标签）为采用毕赤酵母分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品带His标签，在切割反应完成后，可通过Ni²⁺亲和柱轻松去除，极大地简化了后续的纯化流程。

 

产品应用

1、融合多肽和蛋白生产工艺中去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，保障重组融合蛋白准确的N端序列。如DDDDK是八肽Flag标签(DYKDDDDK)的一部分。rEK的使用可以轻松去除融合蛋白的Flag标签，是研究天然蛋白质结构和功能的理想工具。同时，为天然蛋白质序列的放大生产，也提供了便利和保障。

 

产品信息

来源（Source）	毕赤酵母重组表达
分子量*（Molecular Weight）	理论值22.7 kDa
外观（Appearance）	无菌液体
蛋白保存液（Storage Buffer）	50 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH8.0
酶浓度（Enzyme Concentration）	5 U/μL
纯度（Purity）	≥95%
活性定义（Activity Definition）	一个活性单位定义为25℃条件下，酶切12-16 h，在25 mM Tris-HCl，pH 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量。

^*由于毕赤酵母表达后糖基化的影响，SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约40 kDa。

 

储存条件

-15~-25℃保存，有效期1年。

 

使用说明（应用举例）

1. 反应体系：

融合蛋白	50-100 μg（蛋白浓度0.1-1 mg/mL）
肠激酶	0.1-0.2 U (可根据实际情况进行调整)
缓冲体系（20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 2 mM CaCl2, pH8.0）	up to 50

2. 反应条件：充分混匀，25℃反应16 h。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

 

注意事项

1. 该酶效力高, 且与待切蛋白序列或结构有关，建议测试时先做蛋白投入量梯度，以最适量投入为宜。

2. 以下条件可能对rEK的活性有一致作用：

1）高离子强度会抑制其活性。0.25 M NaCl条件下，降低rEK原活性的25%左右；2 M NaCl条件下，rEK几乎完全被抑制其活性。

2）抑制其活性试剂可能有，>2 M Urea，>20 mM b-ME，>0.1% SDS, >50 mM imidazole等。

3）pH<6或pH>9条件也会抑制其活性。

3. 本产品仅作科研用途。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。