产品简介

 

重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

该产品在20403ES基础上进行了工艺优化，与20403ES相比，其纯度更高、活性更强、宿主gDNA残留更低，适用于对酶纯度、活性和残留要求更高的应用场景。

 

产品信息

 

货号	20427ES80 / 20427ES10 / 20427ES50
规格	1 KU / 10 KU / 50 KU
酶活	5 U/μL
酶活定义	在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位
蛋白纯度	≥95%
来源	大肠杆菌表达

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	20427ES80	20427ES10	20427ES50
20427-A	rTEV Protease (5 U/μL)	200 μL	2×1 mL	10 mL
20427-B	rTEV Buffer (10×)	600 μL	6 mL	30 mL

 

储存条件

 

rTEV Protease，-25~-15℃保存，有效期6个月；-85~-65℃保存，有效期1年。

rTEV Buffer，-25~-15℃保存，有效期1年。

注：建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存，避免反复冻融。

 

使用说明

 

1. 在EP管中配制如下反应体系：

组分	用量
融合蛋白	40 μg
rTEV Protease (5 U/μL)	4 μL
rTEV buffer (10×)	10 μL

2. 30℃孵育2h或4℃过夜。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

反应时间（h）	不同温度下剪切活性（%）
	4℃	16℃	21℃	30℃
1	34	58	56	85
2	58	80	78	90
3	71	99	99	99
3.5	84	99	99	99

 

注意事项

 

1.影响天然TEV酶活性的常见因素：

1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而20427ES可兼容上述抑制剂；

2）Zn²⁺离子浓度（>5 mM），同样对20427ES活性有抑制；

3）与半胱氨酸反应的试剂，也是20427ES的潜在抑制剂。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20240722