Hieff NGS^® 1st cDNA Synthesis Kit可用于全长一链cDNA的合成。其产物可以经过二链cDNA的合成后，直接进行测序接头的连接，构建测序文库。

 

产品组分

组分编号和名称			12249ES08		12249ES24	12249ES96
12249-A		Random Primer	16 μL		48 μL	192 μL
12249-B		1st Strand Enzyme Mix	16 μL		48 μL	192 μL
12249-C		10×1st Reaction Buffer	16 μL		48 μL	192 μL

 

运输与保存方法

干冰运输，-20°C存放。效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. 建库需要的其他试剂需自备或另外购买。

3.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

Step 1 RNA变性

1. 将 Random Primer 室温解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。按照表1配置反应液：

表1 RNA预变性反应体系

名称	体积（μL）
Random Primer	2
RNA	14
Total	16

2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖80℃）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一链cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 将第一链合成试剂从-20°C取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表2所示，配制第一链cDNA合成的反应液。

表2 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积（μL）
变性的RNA	16
10×1st Reaction Buffer	2
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	20

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖105℃）25℃，5 min；37℃，45 min；85℃，5 s；4℃，hold。

3. 产物可直接用于二链cDNA的合成或于-80℃暂存。

 

HB220401