推荐应用
1×dsDNA HS Assay Kit是一种快速、灵敏、精确的双链DNA(dsDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒对dsDNA具有高度选择性,在0.2-100 ng区间具有很好的线性关系。本试剂盒操作简单方便,使用时只需将检测工作液与待测dsDNA样品混合,即可使用Qubit荧光仪或荧光酶标仪进行读数。操作简单,结果可靠,是NGS大规模DNA样品定量(如Input DNA定量、DNA文库定量等)的理想选择。本试剂盒对常规的污染物如蛋白质、盐类等具有较好的耐受性(推荐搭配Qubit专用管83509ES使用)。搭配Qubit@荧光仪进行dsDNA定量检测分析见操作说明书,如需匹配酶标仪,使用说明如下:
翌圣Qubit定量系列匹配酶标仪使用说明及注意事项
建议参数设置
| 产品名称 | 货号 | 染料激发波长和发射波长 | 建议的设置激发波长和发射波长 |
| dsDNAHSAssayKitforQubit® | 12640ES | ~480nm/520nm | 480nm/520nm |
| 1×dsDNAHSAssayKitforQubit® | 12642ES | ~480nm/520nm | 480nm/520nm |
1. 使用荧光酶标仪进行dsDNA定量分析(Cat#12640或12642)
注意事项:
① 使用前先将各组分平衡至室温,由于染料在4℃处于结冰状态,使用前必须完全溶解。各组分使用前务必充分混匀,否则可能影响定量结果。
② 由于试剂容易吸附到玻璃表面,使用Cat#12640时要在塑料容器中配制1×工作液。若使用的是Cat#12642则无需配制,直接作为工作液使用
③ 荧光染料均存在淬灭问题,所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
④ 不同酶标仪参数性能不同,最终测量体系和波长设置可能需要根据具体所使用的的荧光酶标仪进行微调试。
实验步骤:
(1) 染料工作液的配置:使用dsDNA Buffer按比例将适量dsDNAReagent稀释至1×(例:一个反应取1μL dsDNA Reagent,加入199μL dsDNA Buffer);若使用的是Cat#12642则此步骤省略。
(2) 向96孔黑色酶标板中加入新鲜配置的工作液,每孔190μL。
(3) 取试剂盒中的dsDNA Standard2,使用dsDNA Standard1或TE Buffer梯度稀释成一系列浓度的dsDNA标准品,一般建议5个梯度。
(4) 向96孔酶标板中加入梯度浓度的dsDNA标准品或者待测样本,每孔10μL,建议设置两个复孔,加入后用移液枪轻轻吸打混匀。
(5) 将酶标板置于室温下避光孵育2min。
(6) 使用荧光酶标仪检测荧光信号值,选择合适的检测波长,激发波长Ex设置为480nm,发射波长Em设置为520nm。利用测得的梯度浓度标准品的荧光信号值与对应的核酸投入量绘制标准曲线,将未知浓度的待测样本测得荧光信号值代入标准曲线中即可得待测样本核酸总量,根据待测样投入体积可计算出核酸浓度。
快速:即用式预混液,操作简单,5min之内出结果;
灵敏: 0.2-100ng的样本,都能准确定量;
准确:竞品同比误差小,均控制在10%以内,批间差异小;
稳定:不同生产批次之间无差异。
1.染料结合特异性好


2.染料结合速度快,荧光信号持续久

3.批间稳定性

2~8℃保存,有效期1年。
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