MGISP-960在根际微生物中的应用：根际微生物的自动化文库构建流程
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2026-08-04
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1. 目的：建立适用于植物根际土的微生物的宏基因组自动化建库流程
2. 平台：MGISP-960（华大智造）
3. 样本类型：植物根际土提取的DNA
4. 下游应用：群落结构与多样性解析、功能潜力与代谢通路、基因组解析与未培养微生物、多组学整合、根际工程与农业转化、环境响应与生态研究等
5. 建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 货号：12972ES
6. 文库类型：Illumina
7. 自动化耗材和数量：96深孔板8个、PCR板6个、滤芯吸头7盒
8. 实验条件：
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样本投入量 |
10 ng |
25 ng |
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酶切片段化/末端修复/加A |
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12972-A |
10 μL |
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12972-B |
10 μL |
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DNA |
40 μL，Up to 60 μL |
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程序 |
4℃-1 min；30 ℃（12-15 min）；72 ℃-20 min；4℃ hold |
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接头连接 |
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12972-C |
30 μL |
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12972-D |
10 μL |
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PE Adapter |
2 μM，5 μL |
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Total |
110 μL |
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连接程序 |
20℃ 15 min，4℃ hold |
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连接产物纯化/分选 |
0.6×磁珠（66 μL）纯化，104 μL洗脱，取100 μL分选，分选比例0.60×/0.15×；22 μL洗脱，取20 μL扩增。 |
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PCR扩增 |
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12972-E |
25 μL |
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Index Primer |
5 μL |
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循环数 |
11 cc |
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扩增后纯化 |
0.8×磁珠（40 μL）纯化，终文库32 μL洗脱，取30 μL上清 |
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质控结果 |
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文库产量 |
1053 ng |
2620 ng |
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文库峰图 |
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