血管生成实验案例十
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2026-04-02
实验所用产品
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产品货号 |
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40186ES |
一、实验前准备与基质胶铺板
基质胶解冻与耗材预冷：提前将Ceturegel® 基质胶从-20℃冰箱取出，放入4℃冰箱过夜融化。将96孔板、无菌移液枪头提前2小时放入-20℃冰箱预冷。
全程低温操作：将预冷的96孔板、移液枪头用酒精喷洒消毒后，放入超净台冰盒内备用。
铺板与聚合：吸取冰浴的基质胶，按 45 μL/孔 的体积加入96孔板。用枪头将基质胶均匀覆盖孔底，操作时避免触碰孔壁。将铺胶后的96孔板放入37℃、5% CO₂ 培养箱中，孵育 30分钟，使基质胶完全胶凝。
二、HUVEC细胞准备与接种
细胞状态：取对数生长期的内皮细胞，细胞融合度达80%-90% 时进行消化。
细胞消化与重悬：PBS清洗3次，用胰酶进行消化。加入等体积完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞形成单细胞悬液。以 1000 rpm 离心3分钟，弃上清。用预热的培养基重悬细胞，进行精确计数。调整细胞浓度至 2×10⁵ ~ 5×10⁵个/mL，细胞悬液置于室温备用。
细胞接种：待基质胶完全凝固后，从培养箱取出96孔板。按 100 μL/孔 的体积加入制备好的内皮细胞悬液。
加样时枪头贴孔壁缓慢滴加，避免直接冲击基质胶导致凝胶层破损。轻轻拍打96孔板边缘，使细胞悬液均匀分布，禁止剧烈晃动。
三、培养、观察与表型记录
孵育：将接种细胞的96孔板放入37℃、5% CO₂ 培养箱中，静置孵育。
动态观察：根据实验需求，在适当时间点（如4-8小时）使用倒置显微镜观察细胞成管情况，并记录管状结构形成的关键时间点。
四、实验结果
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| 图1：4h培养情况 | 图2：8h培养情况 |
（数据来源：锦州医科大学）
血管生成实验小贴士
细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；
基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；
观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。
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