实验所用产品

产品货号	产品名称
40186ES	Ceturegel®基质胶(GFR/不含酚红/不含LDEV)(同康宁matrigel胶)

 

一、实验前准备与基质胶铺板

基质胶解冻：将储存于–20℃或–80℃的基质胶转移至4℃冰箱完全解冻（可过夜放置）。

器材预处理：准备4℃预冷枪头用于吸取基质胶。实验前将24孔板置于冰盒中，并进行紫外照射消毒。

基质胶稀释：如需稀释，按说明书要求使用无双抗且不含FBS的DMEM高糖培养基进行稀释。

铺板与预处理：将完全解冻的基质胶置于冰盒上，轻轻翻转混匀。使用预冷枪头，在24孔板每孔中心加入10–20 μL基质胶，操作时避免触及孔壁，并轻轻涂抹成圆形。在孔板间隙加入PBS防止蒸发，随后将铺胶后的孔板放入密封袋，于4℃静置过夜。

凝胶固化：12小时后取出孔板，置于37℃、5% CO₂ 培养箱中静置 30分钟，使胶体聚合稳定。

二、HUVEC细胞准备与接种

细胞来源与状态：选取生长状态良好的第3–5代HUVEC细胞，待其密度达到约80% 时进行处理。

细胞饥饿处理：将完全培养基更换为含0.2% FBS的DMEM培养基，持续培养24小时进行饥饿处理，使细胞周期同步化。

细胞消化与重悬：饥饿处理结束后，消化细胞，收集细胞悬液并进行精确计数。使用含10% FBS的DMEM培养基重悬细胞。

细胞接种：将细胞悬液以每孔 1.5×10⁵个 细胞、500 μL/孔的密度接种到预先凝固的凝胶基底上。接种时注意垂直缓慢加入细胞悬液，避免破坏胶体结构。轻轻晃动孔板使细胞分布均匀。

三、培养、观察与表型记录

孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃、5% CO₂ 培养箱中继续培养。

动态观察：分别于2、4、6、8小时等时间点，在倒置显微镜下观察并记录管状结构形成情况。应详细记录细胞贴壁伸展、线性连接、管状网络形成等关键形态学变化的时间点。

四、实验结果

图1：2h培养情况	图2：4h培养情况	图3：6h培养情况

（数据来源：重庆医科大学）

 

血管生成实验小贴士

细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；

基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；

观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。