血管生成实验案例九
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2026-04-02
实验所用产品
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产品货号 |
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40186ES |
一、实验前准备与基质胶铺板
基质胶解冻与耗材预冷：将Ceturegel® 基质胶从-20℃冰箱取出，提前一晚放入4℃冰箱解冻至完全解冻。同时将200 μL枪头放入-20℃预冷。
全程低温操作：将完全解冻的基质胶放置在冰盒中，轻轻翻转使其混合均匀。
铺板与预处理：使用预冷枪头，在24孔板孔中央滴入40 μL基质胶。用枪头画圈将基质胶铺平，注意不要碰到侧壁。将铺胶后的24孔板放入4℃冰箱过夜，使其自然流平。
凝胶固化：次日取出孔板，转移至37℃培养箱中静置1小时，使基质胶完全凝固。
二、HUVEC细胞准备与接种
细胞消化与计数：取状态良好的HUVEC细胞，进行消化、离心后，对细胞进行精确计数。
细胞接种：待基质胶完全凝固后，小心吸弃孔内可能存在的液体。调整细胞悬液浓度，使每孔接种2.5×10⁵个细胞（即25万细胞/孔）。将细胞悬液轻柔加入孔板凝胶表面。轻轻晃动孔板使细胞分布均匀。
三、培养、观察与表型记录
孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃培养箱中培养。
动态观察：在培养后的3、6、12小时，使用倒置显微镜（10×物镜）观察并拍照记录。应详细记录不同时间点下细胞贴壁伸展、管状网络形成及成熟等情况。
四、实验结果
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| 图1：6h培养情况 |
（数据来源：浙江大学）
血管生成实验小贴士
细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；
基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；
观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。
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