在PCR技术的发展历程中，热启动技术的出现无疑是一次革命性突破。常规PCR技术在反应体系配制阶段，由于DNA聚合酶在低温环境下已具备活性，极易与引物、模板发生非特异性结合，从而产生非特异性扩增产物和引物二聚体。这些“副产物”不仅干扰目标产物的扩增，还会严重降低实验结果的准确性与可靠性，导致后续数据分析出现偏差甚至错误。

热启动技术通过独特的温度依赖性激活机制，从根源上解决了这一难题。在反应体系配制时，借助物理或化学修饰手段，暂时“冻结”DNA聚合酶的活性，使其无法在低温下启动扩增反应。直到反应温度升至特定阈值，聚合酶的活性才被精准释放，开始特异性地识别并结合目标模板，进行高效、准确的DNA扩增。这种精准的温度控制，规避了低温环境下的非特异性条带和引物二聚体的生成，显著提升了PCR反应的特异性。正因如此，热启动PCR已成为提升PCR特异性的金标准，但传统热启动技术需针对特定DNA聚合酶筛选适配体或抗体，存在研发周期长、操作繁琐等局限。

酶活性封闭类型	化学修饰	配体修饰	抗体修饰
原理	低温下，化学小分子和DNA聚合酶活性中心结合，酶无活性;温度升高至变性温度，两者脱离，酶活性中心暴露，此时，聚合酶发生聚合反应。	核酸适配体通过非共价键作用与聚合酶结合，进而抑制聚合酶在非许可温度下的聚合反应。	高温变性前，抗 Tag 抗体与 Taq 酶结合，抑制聚合酶活性。温度升高至变性温度，抗 Tag抗体变性失活，聚合酶发生聚合反应。
优点	与抗体修饰相比,化学修饰的酶活性维持更加稳定且无任何外源 DNA 污染。此外，性价比高。	不需要激活步骤，减少样品降解的可能性、缩短整个反应时间。	酶激活时间短，减少样品降解的可能性。亲和力强。灵敏度高。
缺点	1、酶激活时间较长(5-15min)，这个过程通常会影响酶的活性，导致 PCR 产物的产量降低。 2、长时间的高温也会导致样品的降解。	1、与其他两种方法比较,特异不够强(45℃C-60°℃左右，配体会与tag 酶分离，泄露 tag酶聚合酶活性)。 2、核酸配体是一种可逆抑制剂，不如化学修饰法稳定。	1、抗体修饰是一种动态平衡，没有化学修饰法稳定。 2、抗体修饰易带来外源 DNA 的污染。 3、价格昂贵。
市场占比	占大多数(Qiagen，Themmo 等)	占比较少(NEB，101bio等)	占大多数(Thermo，Takara等)

相比之下，引物封闭热启动技术独辟蹊径，不再聚焦于聚合酶活性“冻结”，而是通过高亲和性DNA结合蛋白精准捕获引物，从根本上突破了传统技术依赖聚合酶修饰的桎梏。基于引物封闭原理，从源头上阻断引物间的错误结合，解决传统PCR中引物二聚体形成以及非特异性产物生成的难题。该技术既规避了复杂冗长的筛选流程，又极大提升了热启动技术的应用便捷性与反应特异性，为PCR技术的高效、精准应用开辟了新路径。

图1. 引物封闭热启动技术在PCR扩增技术中的原理图示意^[2]

性能展示

HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)

翌圣生物全新研发的HotStart-Primer Binding Protein (Cat#14563)能够在低温下可与引物结合，将引物与Taq DNA聚合酶有效隔离，使其无法被聚合酶利用，从而高效抑制低温条件下非特异性引物延伸产物及引物二聚体的形成，能够显著提升PCR反应的特异性和扩增效率。

有效抑制引物二聚体形成，提高检出率

通过对比实验评估翌圣生物HotStart-Primer Binding Protein与进口品牌Supplier A同类产品对PCR反应中引物二聚体的抑制效果。结果显示，两种产品均能有效减少引物二聚体形成，并显著提高目标序列的扩增效率，表明热启动蛋白技术可显著改善PCR反应特异性。

图2. 翌圣HotStart-Primer Binding Protein提升PCR反应特异性数据展示

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产品类型	产品名称	货号
引物热启动结合蛋白	HotStart-Primer Binding Protein	14563ES

活动细则：

1、活动时间：即日起-6月30日；

2、活动名额有限，每位客户限一套。

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参考文献：

[1] Paul N, Shum J, Le T. Hot start PCR[M]//RT-PCR Protocols: Second Edition. Totowa, NJ: Humana Press, 2010: 301-318.

[2] Kubu C J. HotStart-IT®: A novel hot start PCR method based on primer sequestration[J]. BioTechniques, 2008, 44(2): 275-277.