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COA
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2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗体和Hieff® Taq DNA Polymerase的混合产品。Hieff UNICON® Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase在预变性温度下加热30 sec完全失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。
预混液中已加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。
产品应用
低拷贝基因扩增、基因型鉴定、菌落PCR
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应体系（50 μL）
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组分 |
体积 |
终浓度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
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模板DNA |
适量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
2×Hieff UNICON® HotStart PCR Master Mix (With Dye) |
25 μL |
1× |
【注】：针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50 μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
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模板种类 |
模板使用量 |
|
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒DNA |
100 pg-20 ng |
|
cDNA |
1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
30 sec |
35 |
|
退火 |
50-60℃ |
30 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】：1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
|
10733ES03 |
1 mL |
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10733ES08 |
5×1 mL |
HB210831
