产品简介

 

2×Hieff^® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有Hieff^® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。Hieff^® HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节DNA聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭，经95°C加热后活性才被释放。Hieff^® HotStart DNA Polymerase的激活时间只需要2-3 min，兼容现有的PCR程序。本产品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因分型实验。

 

产品用途

 

本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。

 

质量控制

 

核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37°C下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37°C温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用说明

 

1. 推荐PCR反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)	25	1×
模板	x	-
正向引物F（10 μM）	2	0.4 μM
反向引物R（10 μM）	2	0.4 μM
ddH2O	Up to 50	-

表1 PCR反应体系

 

 

不同模板的推荐使用量：

模板种类	使用量范围（50 μL反应体系）
基因组DNA	50–100 ng
质粒DNA	0.1-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过反应体系的1/10)

表2 不同模板的推荐使用量

2. 反应程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	30 sec	35
退火*	50-60℃	30 sec
延伸**	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	10 min	1

表3 PCR反应程序

 

*推荐退火温度和时间：退火温度推荐使用50-60℃。退火时间推荐设置为30 sec，可以在20-30 sec内调节。可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。

**延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30-60 sec/kb。

***扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。

 

注意事项

 

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20240719