让实验小白也可以做出好的qPCR结果

qPCR实验易做，但数据分析并非想象中的那么容易！数据分析的好与坏，极大程度上依赖于qPCR原始结果的质量。

qPCR结果的评价指标

•溶解曲线，是qPCR结果判定的第一要素。它的作用是判定目的基因是否得到扩增。理论上，当反应体系中仅是目标基因的扩增，才是有效扩增。

•标准曲线，是qPCR结果判定的金标准。（在溶解曲线判定为特异性扩增后）它的作用是测定引物的扩增效率及试剂的检测上下限。根据文章发表对于qPCR数据的要求，扩增效率应在90-110%。

•扩增曲线，是直接生成qPCR定量的数据，即Ct值。从试剂对比角度而言，Ct值大小常被用于判定试剂扩增效率的高低。

产品描述

Hieff Unicon® Power qPCR SYBR Green Master Mix，这是一款旨在解决诸多qPCR实验常见疑难问题的qPCR试剂：

•它减少了大量引物验证的预实验工作，是一款具备强引物兼容性的Mix，

•它明确了qPCR溶解曲线峰型的标准——“单峰的形状”，对于“什么溶解曲线是好的溶解曲线”的解读具有参考意义，

•它让时间不再碎片化，1次体系配制，24 h时间自由支配

产品特点

□引物兼容性强：针对遵循qPCR引物设计原则设计的引物，使用Hieff Unicon® Power 引物使用率可达97%；

□模板加入量灵活：可检测10-107个拷贝个数的基因片段；

□特异性高：标准溶解曲线峰型，有效避免“胖”峰、“多”峰的出现；

□稳定性强：产品经50次反复冻融验证，扩增性能无变化；

□操作灵活：配制好的qPCR反应液4℃保存24 h，扩增性能无变化；

□扩增时间短：每个扩增循环中，退火、延伸一步完成，用时15 sec。

产品性能展示

1. 超高特异性，简化了qPCR实验的引物设计

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图1. Hieff® Unicon Power预混液实现了引物的高特异性扩增

以293T细胞cDNA为模板，利用Prime5软件设计200bp扩增长度的片段（GC含量：30%-70%）的引物共1000对，随机挑选88对，使用Hieff Unicon® Power预混液测定引物的扩增特异性。通过溶解曲线分析，88个检测片段中有86个（97.7%）目标片段有效扩增，说明Hieff Unicon® Power预混液引物兼容性强，具备高特异性扩增、高检出率的特点。

2. 超高特异性，保证了Ct值的真实性

图2. Hieff® Unicon Power预混液扩增高度特异，Ct值结果可信度高

以1 ng人gDNA为模板，使用不同品牌预混液按照标准扩增程序，扩增5个目的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物情况。结果显示Hieff Unicon® Power预混液针对不同靶标基因均可以高特异性扩增，得到可信的靶标片段Ct值。

3. 检测范围宽广，模板添加不再纠结

图3. Hieff® Unicon Power预混液可有效检测6个数量级范围的模板量

以质粒DNA为模板，10倍梯度稀释（107-101 拷贝/μl），扩增IL23R基因。结果显示Hieff Unicon® Power预混液扩增特异，线性相关性高，可在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

4. 良好的稳定性，让体系配制更加灵活：

冻融次数	0次	10次	30次	50次
Ct均值	22.97	22.87	22.99	22.84
△Ct	-	-0.09	0.02	-0.12

4℃保存时间	0 h	24 h	48 h	72 h
Ct均值	22.83	22.89	23.05	23.16
△Ct	-	0.06	0.22	0.3

图4. Hieff® Unicon Power预混液及其配制体系稳定性俱佳
以1 ng 人gDNA为模板，使用Hieff Unicon® Power预混液在不同冻融次数或体系配制后4℃放置不同时间条件下，检测TFRC基因扩增情况。结果显示Hieff Unicon® Power预混液经50次反复冻融或体系配制后4℃保存24h，扩增性能无变化（溶解曲线图数据未做展示）。

5. 兼容快速程序与标准程序：

	30%GC-1号	30%GC-2号	50%GC-1号	50%GC-2号	70%GC-1号	70%GC-2号
标准程序	23.4	22.79	23.79	23.52	23.23	23.60
快速程序	23.29	23.04	23.8	23.57	23.48	23.52
△Ct	0.11	0.25	0.01	0.05	0.15	0.08

标准程序			快速程序
95℃	5 min		95℃	30 sec
95℃	10 sec		95℃	10 sec
60℃	30 sec	40 Cycles	60℃	15 sec	40 Cycles

图6. Hieff® Unicon Power预混液让扩增时间大大缩短
以1 ng人gDNA为模板，扩增不同GC基因片段（30-70%），比较Hieff Unicon® Power预混液在标准程序和快速程序下的扩增效果。结果显示Hieff Unicon® Power预混液可兼容快速扩增程序和标准扩增程序，使用快速程序可缩短扩增时间。

常见问题

Q：如何选择产品？

A：

产品名称	货号	特异性	扩增效率	灵敏度	性价比
Hieff UNICON^® Power qPCR SYBR Green Master Mix	11195ES	★★★★★	★★★★☆	★★★☆☆	★★★☆☆
Hieff UNICON^® qPCR SYBR Green Master Mix	11198ES	★★★★☆	★★★★☆	★★★★☆	★★★★☆
Hieff^® qPCR SYBR Green Master Mix	11201ES	★★★★☆	★★★★★	★★★☆☆	★★★★★

Q：Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix产品可应用于哪些实验？

A：可用于对特异性要求比较高或较难实现特异性扩增的基因片段。这款产品极大程度上避免了引物二聚体、非特异性扩增的出现，特别适合于引物中有单个碱基不同的扩增。

Q：建议的模板加入量？

A：20 μL反应体系，未经稀释的cDNA加入量建议不超过2 μL。

Q：试剂如何储存及保质期？

A：建议-20℃保存，有效期1年。

订购信息

产品名称	货号	规格
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，No Rox)	11195ES08	5 ml
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，Low Rox)	11196ES08	5 ml
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，High Rox)	11197ES08	5 ml

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产品名称	货号	规格
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)	11123ES60	100 T
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox )	11201ES08	5 ml
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus)	11202ES08	5 ml
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus)	11203ES08	5 ml

HB190306