让实验小白也可以做出好的qPCR结果
qPCR实验易做，但数据分析并非想象中的那么容易！数据分析的好与坏，极大程度上依赖于qPCR原始结果的质量。
qPCR结果的评价指标
•溶解曲线，是qPCR结果判定的第一要素。它的作用是判定目的基因是否得到扩增。理论上，当反应体系中仅是目标基因的扩增，才是有效扩增。
•标准曲线，是qPCR结果判定的金标准。（在溶解曲线判定为特异性扩增后）它的作用是测定引物的扩增效率及试剂的检测上下限。根据文章发表对于qPCR数据的要求，扩增效率应在90-110%。
•扩增曲线，是直接生成qPCR定量的数据，即Ct值。从试剂对比角度而言，Ct值大小常被用于判定试剂扩增效率的高低。
产品描述
Hieff Unicon® Power qPCR SYBR Green Master Mix，这是一款旨在解决诸多qPCR实验常见疑难问题的qPCR试剂：
•它减少了大量引物验证的预实验工作，是一款具备强引物兼容性的Mix，
•它明确了qPCR溶解曲线峰型的标准——“单峰的形状”，对于“什么溶解曲线是好的溶解曲线”的解读具有参考意义，
•它让时间不再碎片化，1次体系配制，24 h时间自由支配
产品特点
□引物兼容性强：针对遵循qPCR引物设计原则设计的引物，使用Hieff Unicon® Power 引物使用率可达97%；
□模板加入量灵活：可检测10-107个拷贝个数的基因片段；
□特异性高：标准溶解曲线峰型，有效避免“胖”峰、“多”峰的出现；
□稳定性强：产品经50次反复冻融验证，扩增性能无变化；
□操作灵活：配制好的qPCR反应液4℃保存24 h，扩增性能无变化；
□扩增时间短：每个扩增循环中，退火、延伸一步完成，用时15 sec。
产品性能展示
1. 超高特异性，简化了qPCR实验的引物设计
图1. Hieff® Unicon Power预混液实现了引物的高特异性扩增
以293T细胞cDNA为模板，利用Prime5软件设计200bp扩增长度的片段（GC含量：30%-70%）的引物共1000对，随机挑选88对，使用Hieff Unicon® Power预混液测定引物的扩增特异性。通过溶解曲线分析，88个检测片段中有86个（97.7%）目标片段有效扩增，说明Hieff Unicon® Power预混液引物兼容性强，具备高特异性扩增、高检出率的特点。
2. 超高特异性，保证了Ct值的真实性
图2. Hieff® Unicon Power预混液扩增高度特异，Ct值结果可信度高
以1 ng人gDNA为模板，使用不同品牌预混液按照标准扩增程序，扩增5个目的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物情况。结果显示Hieff Unicon® Power预混液针对不同靶标基因均可以高特异性扩增，得到可信的靶标片段Ct值。
3. 检测范围宽广，模板添加不再纠结
图3. Hieff® Unicon Power预混液可有效检测6个数量级范围的模板量
以质粒DNA为模板，10倍梯度稀释（107-101 拷贝/μl），扩增IL23R基因。结果显示Hieff Unicon® Power预混液扩增特异，线性相关性高，可在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
4. 良好的稳定性，让体系配制更加灵活：
|
冻融次数 |
0次 |
10次 |
30次 |
50次 |
|
Ct均值 |
22.97 |
22.87 |
22.99 |
22.84 |
|
△Ct |
- |
-0.09 |
0.02 |
-0.12 |
|
4℃保存时间 |
0 h |
24 h |
48 h |
72 h |
|
Ct均值 |
22.83 |
22.89 |
23.05 |
23.16 |
|
△Ct |
- |
0.06 |
0.22 |
0.3 |
图4. Hieff® Unicon Power预混液及其配制体系稳定性俱佳
以1 ng 人gDNA为模板，使用Hieff Unicon® Power预混液在不同冻融次数或体系配制后4℃放置不同时间条件下，检测TFRC基因扩增情况。结果显示Hieff Unicon® Power预混液经50次反复冻融或体系配制后4℃保存24h，扩增性能无变化（溶解曲线图数据未做展示）。
5. 兼容快速程序与标准程序：
|
30%GC-1号 |
30%GC-2号 |
50%GC-1号 |
50%GC-2号 |
70%GC-1号 |
70%GC-2号 |
|
|
标准程序 |
23.4 |
22.79 |
23.79 |
23.52 |
23.23 |
23.60 |
|
快速程序 |
23.29 |
23.04 |
23.8 |
23.57 |
23.48 |
23.52 |
|
△Ct |
0.11 |
0.25 |
0.01 |
0.05 |
0.15 |
0.08 |
| 标准程序 | 快速程序 | ||||
| 95℃ | 5 min | 95℃ | 30 sec | ||
| 95℃ | 10 sec | 95℃ | 10 sec | ||
| 60℃ | 30 sec | 40 Cycles | 60℃ | 15 sec | 40 Cycles |
图6. Hieff® Unicon Power预混液让扩增时间大大缩短
以1 ng人gDNA为模板，扩增不同GC基因片段（30-70%），比较Hieff Unicon® Power预混液在标准程序和快速程序下的扩增效果。结果显示Hieff Unicon® Power预混液可兼容快速扩增程序和标准扩增程序，使用快速程序可缩短扩增时间。
常见问题
Q：如何选择产品？
A：
|
产品名称 |
货号 |
特异性 |
扩增效率 |
灵敏度 |
性价比 |
|
11195ES |
★★★★★ |
★★★★☆ |
★★★☆☆ |
★★★☆☆ |
|
|
11198ES |
★★★★☆ |
★★★★☆ |
★★★★☆ |
★★★★☆ |
|
|
11201ES |
★★★★☆ |
★★★★★ |
★★★☆☆ |
★★★★★ |
Q：Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix产品可应用于哪些实验？
A：可用于对特异性要求比较高或较难实现特异性扩增的基因片段。这款产品极大程度上避免了引物二聚体、非特异性扩增的出现，特别适合于引物中有单个碱基不同的扩增。
Q：建议的模板加入量？
A：20 μL反应体系，未经稀释的cDNA加入量建议不超过2 μL。
Q：试剂如何储存及保质期？
A：建议-20℃保存，有效期1年。
订购信息
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产品名称 |
货号 |
规格 |
价格（元） |
促销价（元） |
|
11195ES08 |
5 ml |
|||
|
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，Low Rox) |
11196ES08 |
5 ml |
||
|
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗体法，High Rox) |
11197ES08 |
5 ml |
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