本产品是用大肠杆菌重组表达来源于噬菌体改造后耐热的T7 RNA聚合酶，本品是以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，在50-52℃条件下，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		14807ES90 (5,000 U)	14807ES96 (25,000 U)
14807-A	Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	100 μL	500 μL
14807-B	10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer (NTP Free)	500 μL	5 mL

【注】：10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer中含40 mM MgCl₂和100 mM DTT，但不含有NTP，如需请购买本公司NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each) (Cat#10133)。

 

活性定义

在 50℃、pH8.0 的条件下，1 h内使 1 nmol 的 [³H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

 

运输与保存方法

干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1、DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板；PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

反应体系

组分	加入量	终浓度
10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer	2 μL	1×
模板DNA	0.2-1μg	-
NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 10 mM each)	1 μL each	0.5 mM each
Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	2 μL	-
RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5 μL	1 U/μL
RNase free ddH2O	up to 20 μL	-

 

50℃孵育1 h。

【注】：1. 建议选用Yeasen 公司NTP Set Solution(Cat# 10133)稀释至10倍至10 mM浓度使用，RNase inhibitor 推荐（Cat# 10621）。

              2. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

     3. Buffer和水建议放置到室温，然后开始使用，反应于室温下配制，防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

     4. 确保所有试剂及耗材无RNase残留。

 

HB230216