Thermostable T7 RNA Polymerase 耐热性T7 RNA聚合酶(50 U/μL)

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

本产品是用大肠杆菌重组表达来源于噬菌体改造后耐热的T7 RNA聚合酶,本品是以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,在50-52℃条件下,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

14807ES90

(5,000 U)

14807ES96

(25,000 U)

14807-A

Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

100 μL

500 μL

14807-B

10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer (NTP Free)

500 μL

5 mL

【注】:10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer中含40 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each) (Cat#10133)

 

活性定义

50℃、pH8.0 的条件下,1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

 

运输与保存方法

干冰运输-25~-15℃保存,有效期2年

 

注意事项

1、DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

反应体系

组分

加入量

终浓度

10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer

2 μL

模板DNA

0.2-1μg

-

NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 10 mM each) 

1 μL each

0.5 mM each

Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

2 μL

-

RNase inhibitor (40 U/μL)

0.5 μL

1 U/μL

RNase free ddH2O

up to 20 μL

-

 

50℃孵育1 h。

【注】:1. 建议选用Yeasen 公司NTP Set Solution(Cat# 10133)稀释至10倍至10 mM浓度使用,RNase inhibitor 推荐(Cat# 10621)。

              2. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

     3. Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

     4. 确保所有试剂及耗材无RNase残留。

 

HB230216

400-6111-883