产品简介

 

本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体 T7 RNA 聚合酶，是对野生型T7进行了改造优化，突变得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶。以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板，以 NTP 为底物，合成与启动子下游的反向单链 DNA 互补的RNA。双链线性平末端或 5’突出末端 DNA均可作为 T7 RNA 聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成 RNA 的模板。

 

产品性质

 

来源	重组 E. coli
最适温度	37℃
活性	250 U/μL
宿主核酸残留	<10 fg/U
宿主蛋白残留	<50 ppm
RNA 酶残留	阴性
储存缓冲液	50mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃
活性单位定义	在 37℃、pH8.0 的条件下，1 h 内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为一个活性单位。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	10628ES10  (10 KU)	10628ES60  (100 KU)	10628ES72 (250 KU)
10628-A	CleascripTM T7 RNA Polymerase  (250 U/μL)	40 μL	400 μL	1 mL
10628-B	10×Transcription Buffer	500 μL	1 mL×5	10 mL

 

储存条件

 

-25 ~ -15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1．将所用实验材料从 -20℃拿出，置于冰盒上解冻，充分混匀，短暂离心收集液体于管底，置于冰上备用，

2. 反应体系配制:

 

2.1 普通转录体系

组分	体积（μL）	终浓度
10×Transcription Buffer	2	1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)	2 each	10 mM each
CleascripTM T7 RNA Polymerase (250 U/μL)	1-1.6	-
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5	-
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1U/μL)	0.4	-
模板 DNA	X (1μg)	-
RNase free H2O	Up to 20	-

2.2 共转录加帽体系

如果选择共转录法加帽，则按照下表配制共转录加帽体系：

组分	体积（μL）	终浓度
10×Transcription Buffer	2	1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)	2 each	10 mM each
Cap1 帽子 (100 mM )	2	10 mM
CleascripTM T7 RNA Polymerase (250 U/μL)	1-1.6	-
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5	-
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1U/μL)	0.4	-
模板 DNA	X (1μg)	-
RNase free H2O	Up to 20	-

注： 1）若转录长度< 100 nt，模板投入量可增加至 2 μg，转录时间可增至4-8 h。

2）为了提高RNA质量，建议使用质粒线性化模板进行转录。

3）以上反应体系为推荐反应，NTP，帽子添加量，T7 RNA 聚合酶等均可根据实际情况进行适度调整。

4）20 μL转录体系，参考如上体系可获得 180-240μg 的RNA，若想获得更多的RNA，可等比例放大反应体系，不影响反应。

5）使用试剂、容器等无 RNase 污染。

3. 在 37℃下反应 2-3 h。

4. 反应结束后，加入 1μL DNase I（Cat #10611ES），在37℃反应15 -30 min 去除 DNA 模板。

5. 合成的RNA后续需进行纯化、质控，样品合格可用于后续实验。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240918