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Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品规格 |
|||
|
10153ES10（10 U） |
10153ES60（100 U） |
10153ES76（500 U） |
10153ES80（1,000 U） |
||
|
10153-A |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
10 μL |
100 μL |
500 μL |
500 μL×2 |
|
10153-B |
2×Canace® Plus PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
300 μL |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
|
10153-C |
6×DNA Loading Buffer |
120 μL |
1 mL |
6×1 ml |
12×1 ml |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系
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组分 |
体积 |
终浓度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
|
2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
|
DNA模板 |
适量 |
- |
|
Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 μL |
1 U/50 μL |
【注】：1. 试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2. Mg2+终浓度：体系终浓度为2mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
3. 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
4. 不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：
|
模板种类 |
扩增片段1 kb-10 kb |
|
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
|
cDNA |
1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
| 两步法程序（优先推荐）： | 三步法程序（常规程序）： | |||||||
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
预变性1 |
98°C |
3 min |
1 |
|
|
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
|
|
延伸 |
68°C |
30 sec/kb |
退火2 |
60°C |
20 sec |
|||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
延伸3 |
72°C |
30 sec/kb |
||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|||||
| 梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: | *不同扩增程序下的特点： | |||||||
|
步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
程序类型 |
两步法 |
三步法 |
梯度退火 |
|
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
|
|
变性 |
98°C |
10 sec |
15，每个循环降低1℃ |
特异性 |
高 |
中等 |
高 |
|
|
梯度退火 |
70-55°C |
20 sec |
PCR产量 |
中等 |
最高 |
中等 |
||
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
检出率 |
高 |
中等 |
高 |
||
|
变性 |
98°C |
10 sec |
20 |
|||||
|
正常退火 |
55°C |
20 sec |
||||||
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
||||||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|||||
【注】：1. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
相关产品
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
10154ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
|
|
10148ES60/76/80 |
100 U/500 U/1000 U |
|
|
10149ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
|
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