——细胞疗法、抗肿瘤效应

1. 背景介绍

CAR-T（Chimeric antigen receptor-T cell），又名嵌合抗原受体T细胞，是一种癌症治疗的新免疫疗法。原理主要是通过基因转导使患者体内的T细胞表达特异性识别肿瘤的嵌合抗原受体（CAR），然后将改造后的T细胞回输至患者体内，从而杀死肿瘤细胞。简单地说，CAR-T就是利用人类的免疫细胞来杀伤肿瘤细胞。

与已知的抗体药物相比——无论是传统的单克隆抗体药物，抗体偶联药物以及双特异性抗体，CAR-T明显表现出对肿瘤细胞更强的靶向性和杀伤力。根据Dr. Carl June团队的报道和Eureka科研团队的研究表明，CAR-T可以有效杀死细胞表面抗原表达量较低的肿瘤细胞，拷贝数为几十到几百，而抗体介导的抗肿瘤药物只能杀死细胞表面抗原高表达的肿瘤细胞，拷贝数为几千到几万。

CAR-T必备、无内毒素----全能核酸酶

CAR-T必备、酶活高----牛痘病毒加帽酶

CAR-T细胞修饰专用----慢病毒包装试剂盒

CAR-T全流程之一----T细胞分离与扩增

CAR-T全流程之二----T细胞修饰

CAR-T全流程之三----安全性评估

CAR-T全流程之五----CAR-T细胞增殖

CAR-T全流程之六----CAR-T细胞回输人体

2. CAR-T技术相关流程

1) 分离T细胞：通过外周血血细胞分离机从肿瘤病人血液中分离出单个核细胞，进一步磁珠纯化T细胞。

2) 激活T细胞：通过单克隆抗体、包被磁珠或人工抗原呈递细胞等途径激活T细胞；

3) 修饰T细胞：通过慢病毒包装，病毒侵染T细胞，将CAR 基因转入T细胞中；制备出目的CAR-T细胞；并进行安全性检测。

4) 扩增CAR-T细胞：通过静态或动态培养容器或设备中扩增CAR-T细胞，扩增到所需的细胞数。

5) CAR-T细胞回输入人体：把扩增好的CAR-T细胞通过静脉回输到病人体内，开始进行肿瘤细胞免疫治疗。

6) 监控反应，评估治疗效果。

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图1 CAR-T技术基本流程图

3. CAR-T技术优势

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4. CAR-T技术面临的挑战

4.1癌细胞识别方面

无法有效识别癌细胞，T细胞识别的信息是消灭癌细胞的重要证明。如果找不到这个独特的癌细胞的身份信息，很有可能会杀死正常的细胞。所以精确识别癌细胞的身份信息，依然是目前所要克服的困难之一。

4.2引入新的蛋白

用CAR基因修饰T细胞时，一般要引入新的蛋白，这些新的蛋白有可能会被机体识别，被认为是入侵的异物，起免疫反应后直接被杀死。

4.3 细胞因子风暴

用CAR基因修饰T细胞后，T细胞可能膨胀，CAR-T细胞在血液中超速行驶，扰乱体内正常的秩序。这些会引起患者不良反应，如头疼、发热等等。引起的不良反应统称为细胞因子风暴。

4.4脱靶效应、B细胞缺失

CAR-T细胞的靶点是杀死带有CD19的癌变B细胞，可是B细胞本身就带有CD19蛋白。CAR-T细胞在杀死癌变的B细胞的同时，也会杀死正常的B细胞。造成患者B细胞缺失，引起感染。

4.5 CAR-T治疗的神经毒性

目前尚不了解其机制，导致患者头疼，焦虑，脑水肿。

5. 相关产品

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent	10606ES60	100 ml	299.00
2×Hieff® PCR Master Mix (With Dye)	10102ES03/08	1/5 ml	40.00 /150.00
2×Hieff® Robust PCR Master Mix（No Dye)	10105ES03/08	1/5 ml	65.00 /265.00
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )	11201ES03/08/60	1/5/100 ml	180.00/740.00/12877.00
Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶	11110ES92/93	10000 /50000 U	626.00/2456.00
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix	11137ES60	100 T	1193.00
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10148ES10/60/76/80	10/100/500/1000 U	103.00/683.00/2383.00/4583.00
多片段一步法快速克隆试剂盒	10912ES10/50	10 /5x10 T	457.00/1967.00
T4 DNA Ligase (5 U/µl)	10300ES80	1000 U	425.00
胎牛血清（南美特级）	40130ES76	500 ml	2458.00
一步法快速支原体检测试剂盒	40611ES25/60	25/100 T	467.00/1537.00
Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂	40802ES03/08	1/5 ml	868.00/3248.00
Lentivirus Concentration Solution 慢病毒浓缩试剂盒	41101ES50	50 ml	1353.00
Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包装试剂盒	41102ES10/20/40	10/20/40 T	2553.00/4253.00/7353.00
Benzonase Nuclease全能核酸酶	20156ES25/50/60	25/50 /100 KU	468.00/768.00/1398.00
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶	10615ES76/84/92	500/2000/10000 U	1256.00/3856.00/14856.00
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒	20126ES50/60	50/100 T	935.00 /1545.00
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8 试剂盒	40203ES60/76/80	100/500/1000T	150.00/480.00/920.00
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒	40302ES20/50/60	20/50/100 T	480.00/960.00/1680.00
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒	40706ES60	100 T	800.00
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（FITC）	40306ES20/50/60	20/50/100 T	1178.00/2680.00/4080.00
TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽	40734ES75	300 T	1533.00
Clodronate Liposomes（From Vrije Universiteit Amsterdam）体内巨噬细胞清除剂	40337ES05/10	2/10 ml	1856.00/4376.00
GoldBand 3-color Regular Range Protein Marker（10-180 kDa）三色预染蛋白质分子量标准	20351ES72/76/90	250/500/2500 μl	386.00/676.00/2766.00
GoldBand 3-color High Range Protein Marker（10-245kDa）三色预染蛋白质分子量标准	20352ES76/90	500/2500 μl	786.00 /2996.00
Super ECL Detection Reagent ECL化学发光超敏显色试剂盒	36208ES60/76	100/500 ml	395.00 /1655.00

详情请咨询：400-6111-883

HB20191029

ARMS PCR——基因突变检测新技术！

CAR-T细胞疗法全流程

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