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细胞增殖与毒性常用的检测方法

细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础,是生物体的重要生命特征。细胞通常以分裂的方式进行增殖。细胞毒性(cytotoxic)是由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。

通常细胞增殖和毒性的检测方法有以下几种:

 

① MTT检测法:

MTT是一种黄色染料,已经普遍用于细胞增殖与毒性检测。检测的原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。

 

② CCK-8检测法:

CCK-8检测应该是目前应用得比较广泛得一种细胞毒性与增殖检测方法。CCK-8是Cell Counting Kit-8的简称,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

相比于其他细胞增殖/毒性的检测方法,CCK-8检测法具有以下优势:

1. 产品为溶液,即开即用;

2. 细胞毒性低,细胞形态不变;

3. 检测时间短,适用于批量检测;

4. 试剂稳定性很好,检测时间短;

5. 产品非常便携,并且检测灵敏度高;

6. 酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰,重复性高。

 

③ LDH法检测:

检测原理:LDH (乳酸脱氢酶)在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外,释放出的LDH 在培养基上清中,可通过酶反应来检测。在乳酸脱氢酶的作用下,NAD+被还原生成NADH,NADH和INT(a tetrazolium salt)被硫辛酰胺脱氢酶(Diaphorase)催化反应生成NAD+和红色的甲臜(Formazan),甲臜的量与裂解的细胞数成正比,在490 nm波长下产生吸收峰,从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。

 

图片1.png

LDH检测原理示意图
 

还有其他几种其他方法可以通过反应细胞的存活率,间接的反应细胞的增殖和毒性。比如①阿尔玛蓝(Alamar Blue)是一种氧化还原指示剂,能根据代谢活性产生吸亮度变化和荧光信号。吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比。②台盼蓝(Trypan Blue)染色,一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料,可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜,将其染成蓝色,而活细胞由于其细胞膜的完整性,可将台盼蓝排斥在外,因此,通过颜色的变化即可将活细胞(活细胞呈透明无色)和死细胞鉴别开来。③磺酰罗丹明B(SRB)检测,磺酰罗丹明(Sulforhodamine B,SRB)是一种水溶性蛋白染料,能与细胞内蛋白碱性氨基酸结合形成复合物,其结合于细胞中总蛋白量的多少可以反映细胞数的多少。在515nm波长处测得的吸光值与细胞数呈良好的线性关系。
 

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货号

产品

规格

价格

40206ES76

MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

500T

299.00

40206ES80

1000T

419.00

40206ES90

5000T

1759.00

40203ES60

 

 

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

100T

150.00

40203ES76

500T

480.00

40203ES80

1000T

920.00

40203ES88

3*1000T

1833.00

40203ES92

10*1000T

5122.00

40209ES76

LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶LDH细胞毒性检测试剂盒

500 T

1372.00

40201ES72

MTT 噻唑兰

250 mg

186.00

40201ES80

1 g

356.00

40205ES76

磺酰罗丹明B(SRB)细胞增殖和毒性检测试剂盒 SRB Cell Proliferation and cytotoxicity assay kit

500 T 988.00

40207ES20

0.4% Typan Blue Solution 台盼蓝染色液(0.4%)

20mL

73.00

40207ES60

100mL

193.00

40208ES60

Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒

100T

89.00

40208ES76

500T

279.00

40202ES60

 

Alamar Blue 阿尔玛蓝

100T

98.00

40202ES76

500T

320.00

40202ES80

1000T

600.00

40202ES92

10000T

2162.00

 

 

400-6111-883