ADCC（Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC)）报告基因测定是一种生物发光报告基因测定，用于量化抗体的生物活性。该测定使用效应细胞Jurkat细胞，可稳定表达人FcγRIIIa受体等，驱动萤火虫荧光素酶表达的NFAT反应元件（NFAT-RE）。当抗体与靶细胞上的抗原和ADCC生物测定效应细胞上的FcγRIIIa受体结合时，导致FcγRIIIa的激活以及随后ADCC生物测定效应细胞中的荧光素酶的表达。

YEASEN推出Bio-Firefly萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒（货号11409ES60），具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，适合基于报告基因的生物活性检测和高通量检测，如：Fc效应检测、T细胞激活检测、免疫检查点检测，以及细胞因子、生长因子检测等，可满足绝大多数高通量实验需求。另外，YEASEN也提供ADCC检测用Jurkat效应细胞株（货号42001ES03），我们开发的Jurkat效应细胞株无菌、无支原体污染，细胞株为单克隆细胞株，可用于ADCC作用机制验证、糖基化水平检测、抗体筛选等应用。

ADCC是许多基于抗体的治疗分子的主要作用机制。抗体依赖性细胞毒性（ADCC）是通过抗体的Fc结构域与效应细胞上的Fcγ受体（FcγRs）结合诱导的，而抗体同时通过Fab结构域与靶细胞上的肿瘤抗原结合，这触发了Fc受体的交联和激活，导致细胞因子、穿孔素和颗粒酶的细胞毒性颗粒的形成和释放，最终导致靶细胞杀伤。

图1.ADCC实验原理

图2.ADCC实验流程

图3.抗体稀释参考

图4.CD20抗体利妥昔单抗ADCC报告生物测定代表性数据。将WIL2- S细胞置于96孔白色检测板中，随后加入rituximab连续滴定。然后将ADCC生物测定效应细胞(每孔150000个)添加到检测板上。E:T的比例是6:1。37℃诱导20小时后测定化学发光值。

图5.抗HER2抗体曲妥珠单抗ADCC报告生物测定的代表性数据。将SK-BR-3细胞置于96孔检测板。测定当天，将培养基替换为测定缓冲液并连续滴定曲妥珠单抗。然后将ADCC生物测定效应细胞(每孔150000个)添加到检测板上。E:T比为15:1。37℃诱导20小时后测定化学发光值。

图6.使用Bio-Firefly报告基因检测试剂盒（11409）进行CD20抗体的ADCC效应检测。靶细胞为Raji，效应细胞为Jurkat-luc2p-NFAT-RE- FcγRIIIa-high affinity(V158)。效靶细胞比例为6:1，EC50=34.53ng/ml。

图7.使用Bio-Firefly报告基因检测试剂盒（11409）检测萤光素酶发光情况。Jurkat-luc2p-NFAT-RE-hyg细胞经过不同浓度下lonomycin药物处理，检测萤火虫萤光素酶发光情况，得出EC50=3.465μg/mL。

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Garvin D, Stecha P, Gilden J, Wang J, Grailer J, Hartnett J, Fan F, Cong M, Cheng ZJ. Determining ADCC Activity of Antibody-Based Therapeutic Molecules using Two Bioluminescent Reporter-Based Bioassays. Curr Protoc. 2021 Nov;1(11):e296. doi: 10.1002/cpz1.296. PMID: 34787960.