Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

CCK-8法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

操作简单：产品本身是液体，即开即用；甲臜产物是水溶性的，不需要用有机溶剂溶解。

灵敏度高：线性范围广，灵敏度高，重复性好。

细胞毒性低：细胞毒性非常低，对后续实验没有影响。

稳定性好：培养液中酚红和血清的存在不会对检测造成影响。

应用性广：可用于大规模、高通量样品检测。

同类产品性能比较：

细胞类型：293T人胚肾细胞；培养基：10% FBS 高糖DMEM培养基

孵育时间：3h；细胞数目：1000

引用已发表文献数据：

GIST-T1细胞增殖检测CRTL为空白对照组，Lv-shNC为阴性干扰组，Lv-shOrai1为Orai1敲除组	ROS17/2.8细胞增殖检测WT为野生型，KO为BK基因敲除组
rMSCs细胞活性检测在2.5,5,10,20ug/mL的浓度 G/SWCNT hybrids, G, and SWCNTs处理下的细胞活性检测	rMSCs细胞增殖检测G/SWCNT hybrids 在2.5,5,10,20ug/mL的浓度下处理1,3和7天细胞活性检测
Huh6细胞干扰EZH2基因和阴性对照组细胞活性检测	HepG2细胞干扰EZH2基因和阴性对照组细胞活性检测
GIST-T1 细胞活性检测分别在2-APB 不同浓度0, 50, 100, and 150µM处理下的细胞活力检测	GIST-T1 细胞活性检测分别在SKF-96365不同浓度下0, 0.5, 1.0, and 1.5µM处理下胞活力检测

冰袋运输,-25~-15“C避光干燥保存,有效期2年。

Q：CCK-8 的保存和稳定性如何？

A：CCK-8 稳定性高，避光条件-20℃有效期 2 年，4℃有效期 1 年。经常使用建议 4℃ 保存，避免反复冻融。CCK 正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。

Q：CCK-8 的细胞毒性如何？

A：CCK-8 毒性非常低，因此 CCK-8 检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或 DNA 荧光染色法。

Q：CCK-8 会对活细胞进行染色吗？

A：不会，首先 WST-8 不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外 WST 和 WST-8 甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可清除外源组分。因为 CCK-8 是基于 WST-8 能够被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物（Formazan）的原理研制开发的，因而不会对细胞进行染色。

Q：培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？

A：不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

Q：在加入 CCK-8 时可否不更换培养基？

A：一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。

Q：在实验中OD 值太高或者太低，怎么解决？

A：太高可以缩短加入CCK-8 后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8 试剂后的培养时间由 2 小时缩短为 1 小时。此外，可适当减少细胞的数量。太低可以采取 2 个办法： 1、适当增加细胞数量 2、延长加入CCK-8 试剂后的反应时间。

Q：哪些物质会影响 CCK-8 的实验测定结果？

A：当培养体系内含有还原性物质存在时会还原 WST-8，从而使 OD 值增加；当有氧化性物质存在时会抑制还原反应进而使 OD 值减小。

Q:做细胞毒性实验，我的细胞都死了，为什么我加入CCK8试剂后检测的OD值和对照组OD值差不多？

A:①细胞凋亡或者死亡之后乳酸脱氢酶被释放到细胞培养液中，可以长期存在，从而导致检测的OD值偏大。再次说明细胞的活性和OD值并不能完全划等号。建议客户在加入CCK8的时候更换新的培养基，确保得到准确的结果。

②加入细胞中的检测药物是还原性的，从而导致OD值偏高。建议加入CCK8的时候更换新的培养基。

Q：对照组（培养基+CCK8）的值很高，是为什么呢？

A：可以测一下培养基是否含有氧化还原物质，可能是培养基中的物质引起的。

Q:  细胞不贴壁可以测活性吗？预培养是必须的吗？

A: 需要预培养，如果要向保持细胞的最好状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养 ，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。若不做细胞预培养，需在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

Q: CCK-8能否检测细菌细胞？

A: 可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。

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