产品简介

 

ATP是细胞内最重要的能量分子，可以用来衡量细胞新陈代谢水平，并与活细胞数目具有良好的线性关系，因此，可通过ATP含量反应活细胞的数目。ATP生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和O₂为底物，在Mg²⁺存在时，能将化学能转化为光能。ATP既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，利用Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物——荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比，而ATP与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比。

本试剂盒提供的发光法细胞活力检测试剂线性范围宽、灵敏度高、稳定性好。96孔板中，在100个至100,000个细胞范围内有良好的线性关系，但不同细胞的检测数量上限会有不同。此外，操作简单，试剂盒中提供的检测试剂为即用型，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约10 min，无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。相比于其他常见的细胞活力测定方法，如Calcein-AM、CCK-8等，ATP发光法细胞活力检测更加简便快捷。

图1 ATP Luminescent 超灵敏细胞活力检测试剂盒检测原理

 

产品信息

 

货号	40211ES10 / 40211ES60 / 40211ES80
规格	10 mL / 100 mL / 10×100 mL

 

组分信息

 

组分名称	40211ES10	40211ES60	40211ES80
ATP Luminescent 细胞活力检测试剂盒	10 mL	100 mL	10×100 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃储存，有效期1年。

 

使用说明

 

1.细胞培养

使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100 μL细胞（根据培养时间确定初始接种的细胞密度，检测时每孔细胞数量不宜超15万个），同时设置不含细胞的培养液的孔作为阴性对照。37 ℃，5 % CO₂培养细胞。也可以设置细胞的浓度梯度，以得到最佳的实验结果。根据需要在合适的时间加药处理细胞。

2.（可选）ATP标准曲线的制作

把自备的ATP标准溶液用 PBS稀释成适当的浓度梯度，96孔板每孔加入100 μL的标准品。

3. 细胞活力检测

1）融解冻存的发光法检测试剂，并平衡至室温；

2）取出细胞培养板，室温平衡10 min；

3）96孔板每孔加入100 μL检测试剂（384 孔板每孔25 μL）（由于孔的边缘效应，可能会导致发光信号不稳定，不建议在边缘铺板）；

4）室温振荡2 min，以促进细胞的裂；

5）室温放置10 min，使发光信号趋于稳定；

6）使用多功能酶标仪进行化学发光检测，检测波长560 nm。根据仪器要求设置相应的参数，每孔的检测时间一般为0.25-1 s，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整；

7）根据化学发光读数计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算ATP含量从而得出细胞的相对活力。

【注】：检测效果因细胞的种类不同而异，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到100,000以上可能会出现化学发光读数继续升高，但丧失线性关系。

 

注意事项

 

1. 荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。请勿室温存放。

2. 检测试剂请混匀后使用。

3. 本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。

4. 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通 过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。

5. 检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20230412