MTT 噻唑兰

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产品描述

 

噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。

MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂,也可用来检测NAD。MTT被快速还原成甲臜后,能够螯合镍,铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。

 

产品性质

 

中文别名(Chinese synonym)

溴化噻唑蓝四氮唑;

3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝;

英文别名(English synonym)

 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;

Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;

Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

CAS号(CAS NO.)

298-93-1

分子式(Formula)

C18H16N5SBr

外观(Appearance)

淡黄色至橙色粉末

分子量(Molecular weight)

414.3

纯度(purity)

≥98%

熔点(Melting point)

187℃

溶解性(Solubility)

溶于水,甲醇

结构式(Structure)

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运输和保存方法

 

冰袋运输。4℃避光干燥保存,有效期2年。

 

注意事项

 

1)溶解甲臜的有机溶剂具有毒性,使用时注意防护。

2MTT有致癌性,应小心操作;MTT溶液需要无菌,因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周,因其可能发生降解,导致检测结果错误。

3MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途!

 

使用方法(以96孔板为例)

 

细胞生长的培养条件会影响检测结果,因此进行MTT检测时需考虑这些条件,包括:培养时间,传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况,48-72 h培养时间下,最初铺板的细胞密度可控制在5000-10,000/孔。

【注】:最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。

A.工作液配制

1) MTT溶液

生化研究中,常配制成5 mg/mL的储备液。MTT最好现配现用,可以称取MTT 0.5 g,溶于100 mL的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,4℃ 避光短时间保存。建议小剂量分装放到-20℃长期保存,避免反复冻融。

2) SDS-HCl溶液(MTT终止液)

10 mL 0.01 M HCl加入1 g SDS,颠倒混匀或者超声使其完全溶解,此时即为终止液。建议现配现用。

B.MTT细胞增殖检测

1)接种细胞:用含10%胎牛血清(FBS)的培养液配制成单个细胞悬液,调整细胞密度,以每孔5000-10, 000个细胞接种到96孔板,每孔体积100 µL,培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白对照孔(不含有细胞)。

237℃,5% CO2,培养24-72 h。

3)可选:对于贴壁细胞,去除旧的培养液,更换100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红);对于悬浮细胞,离心96孔板,去除尽可能多的上清液。然后加入 100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红)重悬细胞;

4)每孔加入10 µL MTT溶液(5 mg/mL),加样时尽量勤换枪头,控制加量误差。

5)水平摇床上低速混匀1 min后,放入37℃培养箱孵育4h。【注】对于高密度的细胞(>100,000 cells/孔)可缩短孵育时间至2 h。

6)对于贴壁细胞,直接吸掉旧的培养液,避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞,离心收集细胞,去除培养液。

7)加入100 µL/孔SDS-HCl溶液,用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4 h。【注】:更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

8)孵育结束,放置在酶标仪上摇匀后,选择570 nm,测定吸光度。记录结果,比色以空白调零。

】:对于细胞毒性检测,以未经药物处理细胞的OD值为100%,然后计算药物处理细胞所占的比率(x),公式如下:OD(未处理细胞)/OD(药物处理细胞)=100%/x。然后建立直方图。

 

HB211228

400-6111-883