在生命科学探索的微观世界中,揭示蛋白质之间如何“交流”、如何“携手”执行复杂功能,是理解生命奥秘的关键。然而,捕捉这转瞬即逝的“握手”时刻,传统方法往往面临灵敏度不足、操作繁琐或干扰背景高的挑战。烟草荧光素互补实验,如同一盏高亮度的探照灯,照亮蛋白质相互作用的清晰图景!
为何选择荧光素互补实验?
想象一下:将萤火虫发光的关键酶——荧光素酶,“巧妙”地拆分成两个独立无活性的片段(N-Luc 和 C-Luc)。只有当您感兴趣的蛋白质A和B真实发生相互作用时,它们各自携带的荧光素酶片段才会靠近、互补,瞬间恢复完整的酶活性! 此时,只需加入特制的荧光素钾盐底物,一场肉眼可见或仪器可精确定量的生物发光“盛宴”即刻上演!发光强度直接反映蛋白质相互作用的强弱。
烟草:理想的活体“观测站”
瞬时表达,快速高效: 通过农杆菌浸润技术,目标蛋白基因可快速在烟草叶片细胞中表达,通常 48 小时内即可获得结果,大大加速您的科研进程!
体内环境,贴近真实: 在完整的植物细胞环境中观察互作,更接近蛋白质的天然生理状态,结果更具生物学意义。
荧光素钾盐:点亮互作的关键“火种”
作为该发光反应的核心底物,高品质的荧光素钾盐至关重要:
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高溶解度与稳定性: 确保在反应体系中均匀分布,提供稳定、可重复的发光动力。
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快速穿透细胞: 能够有效进入烟草细胞,与恢复活性的荧光素酶快速反应,产生即刻、强烈的光信号。
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低背景、高量子效率: 最大化发光效率,让微弱的相互作用信号也清晰可辨。
实验步骤
1、参考植物表达载体。利用pCAMBIA - 1300 - NLuc 和pCAMBIA - 1300 - CLuc中的酶切位点,将目标基因与报告基因融合, 获得含有目标基因的重组质粒。
2、将构建好的重组质粒分别转化农杆菌感受态细胞GV3101。
3、选取1个月左右生长健壮的植株,取伸展的烟草叶片, 将混好的菌液用1 mL注射器从烟草叶背面进行注射。为保证相同的生长背景, 需要将对照载体和待检测目标载体的菌液注射在同一叶片的不同部位上,相同的菌液至少注射3–5枚烟草叶片,以保证后续的实验观察。
4、 2 - 3天观察取样。为保证蛋白在烟草叶片中的表达效果, 可以通过加盖塑料壳来保持湿度。
5、取下叶片背面向上,用萤火素底物D-luciferin(40902ES)的反应液喷湿叶片背面,或直接用枪滴加在叶片背面; 将叶片在黑暗中静置一段时间。
6、将叶片置入植物活体成像系统中检测发光情况。如果有发光, 即说明待测蛋白之间存在互作。
7、根据实验结果调整曝光强度并拍照。
产品详情
产品名称 |
货号 |
规格 |
D-Luciferin,Sodium Salt |
40901ES01/02/03/08 |
100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin,Potassium Salt |
40902ES01/02/03/09 |
100 mg/500 mg/1 g/5 g |
D-Luciferin Firefly,Free Acid |
40903ES01/02/03 |
100 mg/500 mg/1g |
Coelenterazine Native |
40904ES02/03/08 |
1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine 400a |
40905ES02/03 |
1×500 μg/2×500 μg |
Coelenterazine h 腔肠素h |
40906ES02/03/08 |
1×500 μg/2×500 μg/5 mg |
Coelenterazine f |
40908ES02/03 |
1×500 μg/2×500 μg |