E.coli宿主菌应用及其残留RNA质控
已知，大肠杆菌(E.coli)表达系统是分子量较小蛋白或结构相对简单蛋白表达的首选宿主，主要表达胰岛素、干扰素和白介素等细胞因子类药物，这些药物中宿主残留核酸和蛋白的含量需要严格控制。另外，在细胞和基因治疗等领域，E.coli宿主菌通常被用于起始原材料质粒DNA的制备。质粒DNA做为细胞治疗和基因治疗药物的中间品或终产品，其中RNA片段的残留可能会降低DNA产品纯度，还可能会对其品质和安全性等产生一定的干扰，因此需对质粒DNA样本中宿主菌残留RNA的含量加以限制。
采用经验证的发酵和纯化工艺虽然可以去除一部分宿主细胞RNA（HCR）等残留杂质成分，但产品中仍然可能会有HCR残留。为保障生产的临床级质粒DNA的纯度和生物学活性，HCR检测项目成为了生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。
残留RNA法规监管要求
残留RNA检测方法
E.coli残留RNA检测Kit产品性能
-
符合法规：按照Chp、USP、ICHQ2（R2）等要求进行全面验证，性能符合中外法规标准；
-
保障品质：试剂盒原材料全自主研发，qPCR Mix等酶产品在超洁净酶工厂生产；
-
配合审计：保障试剂盒生产工艺稳定，批间差可控，有完善的审计文件；
-
灵敏度高：定量下限(LLOQ)可达1fg/μL水平；
-
专属性强：特异性检测E.coli细胞残留RNA，不受其他外源基因组DNA和RNA干扰。
产品信息
| 产品 | 货号 | 品名 | 规格 |
| 样本前处理 试剂盒 |
18461ES | MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（瓶装） |
25T/100T |
| 18462ES | MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒FA（预封装） |
2×16T/ | |
| 6×16T | |||
| 核酸提取仪器 | 80501ES | Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A全自动核酸提取仪 |
32通量 |
| DNA酶 | 14534ES | Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) | 50U/100U |
| 残留RNA检测 试剂盒 |
41318ES | E.coli Host Cell RNA Residue Detection Kit E.coli 宿主细胞 RNA 残留检测试剂盒 |
50T/100T |
参考文献：
[1]European Medicines Agency, 2019. Guideline on quality, non-clinical and clinical requirements for investigational advanced therapy medicinal products in clinical trials.
[2]中国药典委员会（ChPC）.《中国药典》三部[S].北京：中国科学技术出版社，2020：542-543.
[3]《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》，国家药品监督管理局药品审评中心，2022年5月。
[4]USP. Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality (Draft Guidelines).
翌圣质控产品推荐
|
产品定位 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
样本核酸提取
|
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit |
25 T/100 T |
|
|
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA |
2×16 T/6×16 T |
||
|
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA (Prepackaged, Pointed Bottom Plate) |
2×16 T/6×16 T |
||
|
Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A全自动核酸提取仪 |
80501ES |
32通量 |
|
|
宿主残留DNA检测
|
CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit（2G） |
50 T/100 T |
|
|
HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit （2G） |
50 T/100 T |
||
|
Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit（2G） |
50 T/100 T |
||
|
E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit（2G） |
50 T/100 T |
||
|
Hansenula polymorpha Host Cell DNA Residue Detection Kit 汉逊酵母宿主细胞DNA残留检测试剂盒 |
50 T/100 T |
||
|
残留DNA片段分析
|
Vero Host Cell Residue DNA Size Analysis Kit |
4×50 T/4×100 T |
|
|
HEK293 Host Cell Residue DNA Size Analysis Kit |
4×50 T/4×100 T |
||
|
宿主残留RNA检测 |
E.coli Host Cell RNA Residue Detection Kit |
41318ES50/60 |
50 T/100 T |
|
风险基因检测
|
SV40LTA&E1A Residue DNA Detection Kit |
50 T/100 T |
|
|
Replication-competent Lentivirus (RCL) Detection Kit |
50 T/100 T |
||
|
CAR/TCR Copynumber Detection Kit |
50 T/100 T |
||
|
支原体检测 |
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit |
25 T/100 T |
|
|
宿主残留蛋白检测
|
E.coli HCP ELISA kit |
48 T/96 T |
|
|
HEK293 HCP ELISA kit |
48 T/96 T |
||
|
CHO HCP ELISA kit (CHO-K1) |
36714ES48/96 |
48 T/96 T |
|
|
核酸酶残留检测
|
UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit 全能核酸酶检测试剂盒 |
96T |
|
|
UCF.ME® UltraNuclease（M）ELISA Kit |
36702ES48/96 |
48 T/96 T |
|
|
Salt Active UltraNuclease ELISA kit |
48 T/96 T |
||
|
其他蛋白残留检测
|
Protein A ELISA Kit |
48 T/96 T |
|
|
T7 RNA Polymerase ELISA kit |
48 T/96 T |
||
|
Inorganic Pyrophosphatase ELISA kit |
36706ES48/96 |
48 T/96 T |
|
|
Murine RNase Inhibitor ELISA Kit |
48 T/96 T |
||
|
Vaccinia Capping Enzyme ELISA kit |
48 T/96 T |
||
|
RNase/DNase残留检测
|
RNase Viability Assay Kit (Fluorescent Labeling) |
1×96 T/5×96 T |
|
|
DNase Viability Assay Kit (Fluorescent Labeling) |
41322ES48/68 |
48 T/192 T |
