图1 ：RNA疫苗作用过程[1]

circRNA生产过程包括：模板制备、体外转录、DNA模板去除、环化和纯化。在RNA环化后需要用核糖核酸酶R (Ribonuclease R, RNase R)对未环化的RNA进行消化，达到富集circRNA的目的。当前主流使用的RNase R主要为进口品牌，存在价格高、货期久等问题，不适合用于大批量生产。翌圣拥有双向分子酶理性设计与定向进化平台和专门为GMP级别产品打造的分子酶生产基地，从硬件和软件上同时保证产品的品质。经过对蛋白质结构进行理性设计和基于超高通量单细胞分选技术的定向进化，翌圣研发团队成功开发出一款纯度高、消化活性强的RNase R产品，为新一代RNA疫苗/药物上市提供助力

翌圣生物RNase R（Cat#14606ES）是一种来源于大肠杆菌的Mg2+依赖性3'→5'核糖核酸外切酶，它能消化所有的线性RNA，不易消化circRNA、套索RNA或3’端突出末端少于7 个核苷酸的双链RNA分子，常用于去除线性RNA分子，实现富集circRNA和套索RNA等非线性RNA的目的。

• 蛋白纯度（SDS-PAGE）≥95%；

• 无核酸外切酶残留；

• 与A进口品牌RNase R产品消化线性RNA能力相当；

• 与A进口品牌RNase R产品对circRNA富集作用相当。

图2：蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE技术检测产品的蛋白纯度，从左到右依次为相同产品浓度下不同体积（1 μL，2 μL，3 μL）的结果，结果表明翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品蛋白纯度≥95%。

图3：核酸外切酶残留检测：将20 U 翌圣RNase R加入到 0.5 μg λDNA- Hind Ⅲ digest中，于37℃孵育4小时，之后进行琼脂糖凝胶电泳 ，结果显示DNA 条带未发生变化，说明翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品无核酸外切酶残留。

图4：翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品消化线性RNA能力比较：将翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品分别投入含有线性RNA底物的反应体系中进行反应，结果显示当RNase R产品的投入量达到2-4 U时，可观察到RNA条带变微弱甚至消失，表明RNase R对线性RNA分子具有消化作用，且翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品对线性RNA分子的消化能力相当。

图5：翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品对circRNA的富集作用比较：将翌圣（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品分别投入含有circRNA底物的反应体系中进行反应，结果显示经过翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品处理后的RNA条带亮度基本无差别，表明circRNA能耐受RNase R的消化。以上结果证实翌圣（Cat#14606ES）产品与A进口厂家RNase R产品均能有效用于circRNA富集。

图6：翌圣（Cat#14606ES）产品与厂家A和B的RNase R消化线性mRNA分子效果比较：将翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品与厂家A和B的RNase R产品分别投入含有1 μg 线性mRNA底物的反应体系中进行反应，结果显示翌圣RNase R（Cat#14606ES）产品对线性RNA的消化效果优于厂家A和B的RNase R。(数据来源于深圳**客户)

参考文献：

1. Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Circular RNA vaccines against SARS-CoV-2 and emerging variants. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2. Chen L, Wang C, Sun H, et al. The bioinformatics toolbox for circRNA discovery and analysis. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001