mRNA Cap 2氧甲基转移酶（mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA，从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。

 

产品性质

英文名（English Name）	mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
来源（Source）	重组E.coli
浓度（Concertation）	50000 Units/mL
纯度（Purity）	≥99%（SDS-PAGE）
比活（Specific Activity）	≥1.6×105 U/mg
储存缓冲液（Storage Buffer）	20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，100 mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100
活性单位定义（Unit Definition）	一单位（U）定义为：在37℃条件下1 h内甲基化10 pmol的80 nt带帽RNA转录物所需的酶量。

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。推荐分装冻存，避免反复冻融。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		10616ES84	10616ES92	10616ES97
10616-A	mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)	40 μL	200 μL	1 mL
10616-B	10×Capping Reaction Buffer	80 μL	400 μL	2 mL

 

使用方法

1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16 μL；

2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5 min，反应后冰上放置 5 min；

3、按下表（1）配置反应体系（适用于10 μg以内Capped RNA的甲基化反应）；

4、37℃条件下孵育1 h（对与目的片段长度小于200 nt RNA，可将孵育时间增加到2 h）；

表1：20μL反应体系配置

组分名称	体积
Denatured Capped RNA	16 μL
10×Capping Reaction Buffer	2 μL
SAM (4 mM)	1 μL
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)	1 μL

 

注意事项

1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子；

3、反应之前推荐65℃加热5 min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5´端结构复杂，可将时间延长至10 min；

4、本产品仅作科研用途！ 

HB220224