推荐应用
淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium, LSM)是一种滤膜除菌的即用型分离液,用于体外分离人外周血淋巴细胞,也可以从其他组织中分离淋巴细胞,包括脐带血和骨髓细胞等。
每100 mL包含6.2 g聚蔗糖和9.4 g泛影酸钠。20℃下密度是1.0770-1.0800 g/mL。
密度梯度介质产品选购指南:
| 产品货号 | 60378ES | 60350ES | 40502ES | 40501ES | 40515ES |
| 产品名称 | 氯化铯(超纯级) | 蔗糖 | Ficoll 400 | Percoll | 60% W/V 碘克沙醇溶液 |
| 主要组成 | 氯化铯 | 蔗糖 | 蔗糖与环氧氯丙烷的聚合物常与泛影酸钠/甲泛影钠复配为淋巴细胞分离液 | 涂有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的胶体二氧化硅 | 碘克沙醇 |
| 离子性 | 离子型 | 非离子型 | 非离子型 | 非离子型 | 非离子型 |
| 特性 | 水溶性大 | 成本友好 | 强亲水性可透析物质含量低 | 温和无毒 高稳定性 常见下游分析(例如电泳实验)需去除残留 | 温和无毒 代谢惰性 仅在电镜观察前需去除残留碘克沙醇 |
| 渗透压 | 高 | 高 | 优于蔗糖 | 低 | 在有用密度下均等渗 |
| 粘度 | 较低 | 高 | 高,比同类蔗糖溶液更粘 | 低 | 低 |
| 细胞毒性 | 有 | 有 | 无 | 无 | 无 |
| 梯度类型 | 连续/不连续均可 | 连续/不连续均可 | 连续/不连续均可 | 不连续 | 连续/不连续均可 |
| 适用场景 | 适用于DNA和RNA分离 | 适用于细胞器、病毒、外泌体、DNA/RNA分离等,不适用于细胞分离 | 用于分离对离心沉淀敏感的细胞,以及用于分离密度相似但大小不同的细胞,PBMC/淋巴细胞分离首选淋巴细胞分离液同时,其还能作为半抗原载体和电解质稳定剂等 | 通用性强,广泛用于分离细胞、亚细胞成分、膜囊泡、细菌及病毒等,也常用于分离和纯化植物原生质体、叶绿体、线粒体。 | 适用性广泛,适用于细胞(包括敏感细胞)、细胞器、膜囊泡、病毒、死细胞等要求高分辨率、高活性、高回收性的分离场景。 |
工作原理
用去纤维蛋白或肝素处理人血,以1:1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释,在分离溶液中分层,低速离心30 min。离心过程中,由于差速迁移最终形成不同的细胞层。
红细胞和多形核粒细胞,它们通过梯度迁移至管底。由于其密度不同,淋巴细胞和其他单个核细胞(单核细胞和血小板)分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收,最后进一步清洗去除血小板,LSM和血浆。
注意事项
【产品近期(24年底到25年初)会进行包装升级更换,产品工艺不变,如收到新旧包装,都属正常】
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
2)稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的生理盐水为无菌液体;
3)为保持淋巴细胞的活性,应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层,包括淋巴细胞和单核细胞。
4)本产品仅作科研用途!
操作方法
(用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人体血液;对于其他物种或者其他组织的血液,需要对此程序做出一定的改进)
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合。
2. 无菌条件转移3 mL LSM到15 mL离心管中。
3. 用2 mL生理盐水混合2 mL去纤维蛋白血液或肝素化血液。
4. 小心将稀释血液加入含有3 mL LSM(室温)的15 mL离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400×g离心15-30 min,离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞,同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞,如下图所示(分层情况从上到下依次为血浆层-单个核细胞层-LSM层-RBC颗粒)。
6. 吸出淋巴细胞层上方2-3 mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM层,并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中,室温(18-25°C)离心10min,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞的范围,例如160-260×g(清洗去除LSM,并降低血小板的百分比)。
8. 再用平衡盐缓冲液清洗细胞,最后取适当的培养基(实验者所用)重悬细胞。

室温运输、15-30°C保存,有效期2年。
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