本产品采用DH5α菌株经特殊工艺处理得到得感受态细胞，可用于DNA的化学转化，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传，适用于蓝白斑筛选。DH5α细胞重组酶recA1和核酸内切酶endA1基因缺失突变使其能保证克隆DNA的稳定性。F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育，只需10 min即可完成一次转化。使用pUC19质粒检测，转化效率约达10⁸ cfu/μg DNA。

DH5α细胞基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA

 

产品组分

组分编号	组分名称	11803ES80
11803-A	F-DH5α感受态细胞	10×100 μL
11803-B	pUC19 (control vector, 10 pg/μL)	10 μL

 

储存条件

-85℃~-65℃保存，有效期6个月。请勿将本品置于-20℃或液氮中保存。

 

使用方法

1. 快速转化操作方法（10 min）

1）提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。

2）将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上，待菌体融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻弹匀，冰浴静置5 min。

*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

3）用200 μL移液枪将上一步的混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，均匀涂布。

4）将平板置于37℃培养箱倒置过夜培养。若进行蓝白斑筛选操作，平板在37℃至少倒置培养15 h。

2. 快速热激转化操作方法（25 min，可提高转化效率）

1）将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上，待菌体融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻弹匀，冰浴静置5 min。

*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

2）42℃水浴热激45 sec，迅速插回冰上静置2 min，此过程不要晃动。加入700 μL不含抗生素的LB，37℃，200 rpm复苏10分钟，均匀涂板。

3）将平板置于37℃培养箱倒置过夜培养。若进行蓝白斑筛选操作，平板在37℃至少倒置培养15 h。

3. 常规热激转化操作方法 

1）将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上，冰浴、解冻（大约5 min）。

2）立即向解冻后的感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻弹匀，冰浴静置25 min。

*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

3）42℃水浴中热激45 sec，然后快速将EP管转移到冰上，静置2 min。

*此过程不要晃动，否则会降低转化效率。

4）向离心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60 min。

5）5,000 rpm离心1 min收集菌体，留取100 μL左右上清涂布至含有相应抗生素的培养板上，37℃培养过夜。如进行蓝白斑筛选操作，请将平板放 37℃培养至少15 h。

 

注意事项

1. 本产品不可反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。

2. 本产品在冰中解冻时间不宜过长，感受态细胞刚化冻时转化效率最高。

3. 加入质粒应轻柔操作。

4. F-DH5α感受态细胞既可以快速转化也可以常规热激转化，对于>7 kb质粒的构建，为提高转化效率，可采用常规转化方式进行转化。

5. F-DH5α感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降（无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7. 本产品仅作科研用途！

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      Ver.CN20230928