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单点/多点定点突变随心变

—想变哪里变哪里
 

定点突变技术是利用PCR等技术定向改变基因的特定碱基序列,是研究基因功能和蛋白功能的一种非常有用的手段。通过该技术,可迅速,高效提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,从而来阐明目的基因的调控机理,以及下游实验中的蛋白质结构与功能的关系。

翌圣生物推出的定点突变试剂盒基于Hieff Clone® 快速克隆技术的定点突变系统,目标质粒扩增产物经DpnI消化、Hieff Clone®重组环化后直接进行转化即可完成定点突变。高效快速的实现直接对目标质粒中的靶位点进行单点突变,多点突变,以及插入或缺失等。

产品优势

 
 

» 应用范围广:可进行单点,多点突变

» 扩增性能优越:超高保真酶可扩增长度小于20kb的任何质粒

» 高效DpnI酶:可充分有效降解未突变的质粒模板

操作流程

 
 

» 引物设计与目标质粒扩增

反向PCR引物中需引入同源臂和突变位点。

» DpnI 消化质粒模板

质粒模板来源于大肠杆菌,为dam甲基化修饰,对DpnI敏感而被切碎。反向PCR合成的带突变位点的线性化质粒因没有甲基化而不被切开

» 重组反应

同源臂在重组酶的作用下进行重组。

 图片1.jpg

1. 进行单碱基(或多碱基)定点突变实验流程

 

部分发表文献

 
 

[1]. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017.IF37.205

[2]. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019.IF31.398

[3]. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. IF31.398

[4]. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158.IF 20.46 

[5]. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7.IF14.548

[6]. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019.IF14.548

 

FAQ

 
 

Q1. 请问单点突变/多点突变是否都是每个位点设计一对引物?是否都包括碱基/氨基酸突变,碱基插入和缺失?碱基插入/缺失的最大长度是多少?是否可以进行连续氨基酸的突变,氨基酸的数量限制是多少?

A1:单点突变/多点突变是每个位点设计一对引物;正反向引物可以包括碱基/氨基酸突变,碱基插入和缺失,也可以将这些放在一条引物上;碱基插入/缺失的最大长度没有限制,可为任何长度;可以进行连续氨基酸的突变,无特别数量限制。

Q2. 引物设计的原则是什么?有无官网的引物设计软件,若没有,推荐几个好用的引物设计软件。

A2:引物设计基本原则是使扩增产物末端有同源序列即可。无官方设计软件,推荐软件Primer5,Vector NTI。

Q3. 本试剂盒可以进行多点突变,能够同时进行几个位点的突变? 突变效率如何?进行单点突变的突变效率是多少?

A3:最高同时突变6个独立位点(每个位点之间相距超过100bp)。突变效率非常高(单次反应500多个克隆,阳性率超过95%)。

Q4. 该kit不含有感受态细胞,推荐的感受态细胞是哪些?
A4:Top10、DHJM109等常规感受态。

订购信息

 
 

应用

产品名称

产品货号

规格

单碱基、不连续双碱基

Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒

11003ES10

10 T

三至五个不连续位点

(相距超过50bp)

Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒

11004ES10

10 T

 

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产品名称

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10510ES60*

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10510ES80*

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HB210728

400-6111-883