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COA
已发表文献
本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解，并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
翌圣为您提供Western Blot实验整体解决方案，相关产品选购请参考：WB实验系列产品-选购指南
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
使用说明：
(一) 细胞样品
1. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×10⁵-1×10⁶个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
（二）组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3.按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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20101ES60 |
100 mL |
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20114ES60 |
100 mL |
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20115ES60 |
100 mL |
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20118ES60 |
100 mL |
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20103ES60 |
100 mL |
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20106ES76 |
500 g |
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20107ES76 |
500 mL |
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20108ES76 |
500 mL |
HB181121
