产品描述

线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器，是细胞的动力工厂，细胞进行氧化磷酸化的场所。因此，对线粒体进行分离，以此为对象，对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体，获得的线粒体纯度较高，且绝大部分都含有完整的内膜和外膜，可用于线粒体的生理功能等方面的研究，得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白，从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。

按照每个样品使用量（细胞1-5×107个；组织：100-200 mg），20128ES50/20128ES60可分别进行50个和100个样品的抽提。

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产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		20128ES50（50 T）	20128ES60（100 T）
20128-A	Reagent A试剂A	100 mL	100 mL×2
20128-B	Reagent B试剂B	50 mL	100 mL
20128-C	Reagent C试剂C	1 mL	2 mL
20128-D	台盼蓝染色液	10 mL	20 mL

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。台盼蓝染色液可4℃保存。

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

使用方法

一、线粒体的抽提

1. 样本处理
1）组织匀浆：称取100-200 mg新鲜组织，预冷的PBS或生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5 mL冰预冷的试剂A，混匀，孵育8-10 min，匀浆10-30下左右，也可采用超声方法破膜。
2）培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 g，4℃ 离心5-10 min收集细胞。计数，每次提取需要1-5×107个细胞，加入1-2.5 mL预冷的试剂A，重悬细胞，混匀，冰上孵育10-15 min，可以采用超声或匀浆器方法破膜。
注：观察细胞膜破碎情况，可取少量细胞液，与台盼蓝染色液按照1:1比例混合后，镜检。当大多数（≥80%）细胞为蓝色，可进行下面实验。

2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4ºC，1000 g离心10 min。【注】：细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。 

3. 收集上清液并转移到新的离心管。4ºC，1000 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4. 将上清液转移到新的离心管。4ºC，12,000 g离心10 min，小心去除上清，沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
注：离心后的上清含胞浆成分，尽量除去上清。

二、线粒体蛋白的抽提

1. 向每毫升预冷试剂B加入10 μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。

2. 按每10 μL线粒体压积中，加入100 μL上述配制好的试剂B/C溶液。

3. 置于4℃ 15-30 min，间断涡旋振荡。

4. 10,000 rpm，4℃离心15 min，取上清，即为线粒体全蛋白提取物，进行蛋白定量。

5. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。

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