产品信息

 

产品名称	产品编号	规格
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus(for Urine) 尿液外泌体快速提取分离试剂盒Plus	41207ES05	5 T
	41207ES20	20 T

 

产品简介

 

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	41207ES05	41207ES20
41207-A	Exosome isolation solution（Urine）*	30 mL	120 mL
41207-B	Exosome Buffer*	2 mL	10 mL
41207-C	50 mL过滤柱	5 个	20 个

* Nuclease-free, Sterile

 

储存条件

 

室温运输，室温保存，有效期2年。

 

注意事项

 

1. 使用前请将外泌体抽提试剂（41207-A）充分混匀;
2. 将外泌体样本与裂解液按体积比1:1混匀后置于冰上裂解10 min；
3. 于4℃以12,000×g离心5 min取上清，用BCA法测定蛋白浓度及进行Western Blot等后续实验；  
4. 进行Western Blot实验时，取CD81阳性对照品5 - 20 μL与实验样品平行上样；

注：初次使用CD81阳性对照品时，可根据自身实验条件, 通过预实验确定合适的上样量以获得更佳的实验结果；

5. 二抗Goat anti-Rabbit IgG antibody (HRP)稀释比例建议为1:2000~1:5000；
6. CD81阳性对照品上样前需70℃煮样5 min，BCA及Western Blot实验相关试剂需自备。

 

操作方法

 

1. 样本预处理

1）收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。将外泌体样本与裂解液按体积比1:1混匀后置于冰上裂解10 min；

2）取25 mL（单次样品量不能低于25 mL）体液样品转移至离心管中，2-8℃，3000 × g离心10 min，弃沉淀（可多次离心至无明显沉淀），并将上清转移至过滤柱（41207-C）中。（可多次离心至无明显沉淀）

3）将过滤柱转移至离心机中，2-8°C，3000×g离心10min，取过滤柱收集管中的液体，转移至新管中。

2. 外泌体分离

1）向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）

Urine	41207-A 试剂用量
25 mL	5 mL
50 mL	10 mL

2）盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于2-8°C冰箱静置2 h;

3）取出装有混合液的离心管，2-8°C，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4）吸取一定量体积的Exosome Buffer溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于Exosome Buffer后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入Exosome Buffer的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：Exosome Buffer体积=50:1。

5）将含有重悬液的1.5 mL离心管于2-8°C，12,000×g离心5 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤5，多次离心至无明显沉淀。

6）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于2-8°C保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

3. 外泌体除菌(可选)

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

 

Ver.CN20250114