产品简介

 

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从体液如脑脊液、羊水、唾液、肺泡灌洗液及鼻腔盥洗液等体液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	41204ES10	41204ES30
41204-A	Exosome isolation solution（Body Fluids）	10 T (5 mL)	30 T (15 mL)

 

储存条件

 

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

 

使用说明

 

1.样品制备：

1）收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2）取1 mL（单次样品量不能低于1 mL）体液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3）将转移的上清，4 ℃，12,000×g离心10 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

2.外泌体分离：

1）向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）。

Body Fluids	41204-A 试剂用量
2.0 mL	0.5 mL
4.0 mL	1.0 mL

2）盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，再放置于2℃至8℃静置8 h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）。

3）取出装有混合液的离心管，4℃，12,000×g离心30 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4）将含有沉淀的离心管再次于4℃，12,000×g离心2 min，弃上清（尽可能吸尽上清液）。

5）吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=10:1。

6）将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤6，重新进行洗涤和沉淀。

7）纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

外泌体浓缩（可选）：

鉴于体液中杂蛋白较多，如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序，建议进一步纯化外泌体。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒；除此之外，还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，建议外泌体蛋白浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

 

注意事项

 

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41204-A）充分混匀。

2、产品只针对体液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20230920