外泌体曾经被认为是细胞卸载废物的一种方式，在过去的十年中，我们对外泌体的看法发生了巨大变化。我们已经开始认识到，外泌体是从细胞中释放出来的，通过其RNA，蛋白质，脂质和DNA的载体充当信号载体和组织重塑者。参与癌症，炎症，免疫，中枢神经系统功能，心脏细胞功能。

外泌体在这些基本生物过程中的作用，它们作为生物标志物，也可作为靶向递送生物分子药物载体（如治疗）的工具研究。获取和研究外泌体所需的一切，从分离和鉴定分析以及染色等。基于qPCR的外泌体miRNA分析还是RNA-Seq方法，我们都有高质量的外泌体研究产品来支持您的科学研究并推进您的工作。

 

外泌体是什么？

外泌体(Exosome)是由细胞内多泡体与细胞膜合后，释放到细胞外的一种直径约30-150nm的膜性囊泡，区别于微囊泡（100-1000nm),凋亡小体（400-4000nm）。

目前学术界主流观点认为外泌体的产生过程为:细胞膜内陷形成内体(Endosome)，然后再形成多囊泡体(Mutivesicutar bodes，MVB)，最后分泌到细胞外成为外泌体。细胞在培养过程中可以分泌产生外泌体。

外泌体是细胞分泌的膜性囊泡，由磷脂双分子及其携带的膜性分子组成，其主要成分为蛋白质、酶、mRNA、miRNA、DNA片段和脂质等。

 

性质分类	外泌体 Exosomes	微囊泡 Microvesicles	凋亡小体 Apoptotic Bodies
直径	30-150 nm	100-1000 nm	400-4000 nm
密度(g/mL)	1.10-1.18	1.02-1.22	1.16-1.28
蛋白标记物	Alix、TSG101、HSC70、CD63、CD81、CD9	Selectin、Integrins、CD40、MMP	Histones
来源	细胞内的多泡小体与细胞膜融合后，其内的小泡释放到细胞外	细胞膜出芽形成	凋亡时细胞膜皱缩内陷，分割包裹胞质形成的泡状小体
携带遗传信息	mRNA、miRNA、DNA	mRNA、miRNA、DNA	mRNA、miRNA、DNA
功能	胞内信息传递，胞外物质交换	胞内信息传递，胞间遗传物质运输	调理病理学及生理发生过程

 

外泌体研究应用

• 载体药物研究：外泌体可作为载体将包裹在内的药物运送到目标区域，做到靶向治疗；
• 诊断研究：主要研究外泌体的种类、数目、大小和内容物与疾病之间的关系，来预测疾病的发生与进展（如阿尔兹海默症）；
• 间充质干细胞外泌体改造：间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，间充质干细胞来源更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量；
• 外泌体biomarker：外泌体内容物分析转录组测序、芯片（mRNA、LncRNA、miRNA，cirRNA）、蛋白质组、代谢组分析。

 

外泌体的科研思路

对外泌体进行提取以后，通常对外泌体进行鉴定，方法为：NTA粒径分析、电镜扫描和Western Blot，WB中的常见指标有CD9, CD63, CD81、TSG101，后续科研思路比较广泛，其中外泌体内含RNA表达谱研究二代测序的研究是热门的科学研究方向，下图为常见的科研思路的整理图：

外泌体的提取

翌圣生物经过研发，开发出独特的分离技术，可以快速从各种样本中如血浆/血清，细胞培养上清，尿液，乳液，腹水，羊水，唾液等其他体液中获得大量完整的外泌体，适用于下游共培养，电镜分析和高通量测序等实验。

 

翌圣外泌体提取试剂盒核心优势

• 涵盖细胞上清、组织、尿液、血清血浆、乳液等；
• 样品处理量大、可达同类产品5倍以上；
• 外泌体可用于细胞共孵育和组学研究；
• 专注外泌体试剂盒研发持续优化。

 

翌圣外泌体提取试剂盒选购指南

货号	产品名称	规格	价格	选购指南
41205ES	Hieff® Quick Exosome Isolation Kit Plus (for Cell Culture Media) 细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒Plus	20 T	3739	适用于细胞上清(尿液)，可以提取40 mL细胞上清液
41206ES	Hieff® Quick Exosome Isolation Kit Plus(for Serum/Plasma) 血清/血浆外泌体快速提取分离试剂盒Plus	30 T	3155	适用于血清血浆，可以提取30 mL
41216ES	Hieff® high purity exosome isolation kit（for Serum/Plasma） 高纯度血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒	20 T	3775	适用于血清血浆(血浆优先选该试剂盒)，可以提取2 mL，为41206ES升级版
41207ES	Hieff® Quick Exosome Isolation Kit Plus (for Urine) 尿液外泌体快速抽提试剂盒Plus	20 T	3755	适用于尿液，提议提取500 mL
41208ES	Hieff® Quick Exosome Isolation Kit Plus(for Body Fluids) 体液外泌体快速提取分离试剂盒Plus	30 T	3755	适用于体液，提议提取60 mL
41209ES	Hieff® Quick Exosome Isolation Kit Plus(for Milk) 乳液外泌体快速提取分离试剂盒Plus	20 T	4255	适用于牛奶、羊奶、马奶、驼奶等400-500 mL的初始乳液
41212ES	Exosome Purification Column 外泌体纯化柱	10T/20T /30T	849/1255 /1779	试剂盒配套纯化柱

 

外泌体的鉴定三件套

• 电镜检测：通过TEM透射电镜看清外泌体形态；
• 粒径检测：通过NTA，看外泌体颗粒大小及分布；
• Western Blot检测：WB分析典型的标记蛋白包括四跨膜蛋白超家族，如CD9、CD63、CD81等，定性鉴定检测需要选择至少2个指标才能达到文章发表要求，比如检测CD63和TSG101。外泌体鉴定试剂盒（货号：41203ES05 ）是翌圣生物针对外泌体标志蛋白CD63和TSG101检测而研发的一款高效且方便的产品。试剂盒内的抗体经过严格筛选而得，适用于外泌体CD63和TSG101蛋白的检测。该产品适用于人、大鼠、小鼠外泌体的鉴定。

 

翌圣外泌体鉴定相关产品推荐

货号	产品名称	规格	价格
41203ES	Exosome identification kit for Westernblot 外泌体鉴定试剂盒	5 T	3485
40217ES	Exosome CD81 Protein Assay Kit 外泌体CD81蛋白检测试剂盒	5 T	599
31293ES	Calnexin Rabbit pAb	50 μL/100 μL	1185/2285
30039ES	CD9 Rabbit pAb	50 μL/100 μL	1185/2285
31514ES	CD9 Rabbit mAb	50 μL/100 μL	1285/1985
30009ES	CD63 Rabbit pAb	50 μL/100 μL	1185/2285
31513ES	CD63 Rabbit mAb	50 μL/100 μL	1285/1985
31428ES	CD81 Rabbit mAb	50 μL/100 μL	1285/1985
30011ES	Hsp70 1A Mouse mAb	50 μL/100 μL	1285/1985
30010ES	TSG101 Rabbit pAb	50 μL/100 μL	1185/2285
31512ES	TSG101 Rabbit mAb	50 μL/100 μL	1285/1985

 

外泌体的示踪

通过对外泌体体外荧光标记示踪，可以对外泌体功能性进行研究，包括蛋白组学研究、外泌体活体成像实验、外泌体启动子活性研究等。目前荧光标记外泌体的方法有很多，主要包括亲脂性染料PKH-67/PKH-26、亲脂性羰花青染料DiI/DiD/DiO/DiR、以及渗透型的化合物标记法：CFSE/CFDA/Calcein-AM等。

 

翌圣外泌体示踪相关产品推荐

货号	产品名称	规格	价格
40780ES	Hieff® exosome tracker kit (for red fluorescence) 外泌体红色荧光示踪试剂盒	20 μL	1855
40781ES	Hieff® exosome tracker kit(for green fluorescence) 外泌体绿色荧光示踪试剂盒	20 μL	1855
40726ES	DiI (DiIC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针	10mg	3739
40725ES	DiO (DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针	10mg/25mg	3155
40758ES	DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针	25mg	3775
40757ES	DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针	25mg	3755

 

高纯度外泌体

随着应用型客户对于外泌体纯度要求的提高，翌圣生物基于大规模外泌体分泌纯化工艺平台，经过数十项质量控制，推出高纯度外泌体产品，其中包括293T外泌体，牛奶外泌体等。

产品优势

• 样本来源清晰可追溯；
• 无血清培养，排除外泌体干扰；
• 纯度高：经多种工艺分离纯化制备；
• 适用范围广，结果可靠稳定；

产品应用

• 作为标准外泌体颗粒，可应用于流式细胞检测、蛋白质印迹、外泌体成像等研究使用；
• 作为采用外泌体的核酸和蛋白质生物标记研究的标准品；
• 作为体外和体内生物学功能研究的对照外泌体；

高纯度外泌体产品推荐

货号	产品名称	规格	价格
41219ES	293T Cell Exosome  293T细胞外泌体	100 μg	3499
41220ES	MSC Cell Exosomes (Human)  MSC细胞外泌体（人）	100 μg	4199
41221ES	NK Cell Exosomes (Human)   NK细胞外泌体（人）	100 μg	4199
41222ES	Milk Exosome  牛奶外泌体	20 mg/100 mg	3499/11999

 

外泌体专用培养基

本产品是针对外泌体开发的一种培养基，产品主要成分为HEPES, L-Glutamine,  Pharm Grade Albumin, Hypoxanthine, Thymidine, Phenol Red, Glucose. 无动物源Xeno-free, Serum-free，不含生长因子（Growth factors），细胞培养过程中无需添加血清即可达到完全培养基的培养状态，有利于外泌体的收获。

数据展示

 

外泌体培养基产品推荐

货号	产品名称	规格	价格	适用范围
41210ES	Hieff® Serum-free Medium(for Exosome) 外泌体专用无血清培养基	50 mL/500 mL	229/1939	适用细胞：肿瘤细胞系及T细胞
41213ES	Hieff® Exosome Serum-free Medium （for MSC） 外泌体无血清培养基（间充质干细胞专用）	50 mL/500 mL	519/3079	适用细胞：间充质干细胞专用

 

外泌体研究常见问题

1.不同样本提取注意事项

（1）细胞培养上清：细胞培养过程中需注意污染、培养时间、细胞死亡率及血清的问题；

（2）血液：需区分血浆与血清采血针的大小和采血时间；

（3）尿液：需注意个体年龄、性别、进食情况和新鲜度；

（4）唾液：需注意取样位置和取样时间，舌下腺、颌下腺、腮腺；

（5）乳汁：泌乳的阶段、胎次、膳食、泌乳量、是否是母乳喂养、母亲的健康状态、精神状态等都会影响外泌体的分泌；

（6）脑脊液：样本的获取量少，样本中外泌体丰度低。

2.如何获得高质量的细胞上清液外泌体？

（1）细胞培养的原则：

1. 降低血清的使用量；
2. 使用去外泌体血清；
3. 使用无血清培养基替代基础培养基；
4. 注意支原体的污染。

（2）细胞上清液预处理原则：

1. 通过差速离心，依次去除细胞颗粒、细胞碎片；
2. 也可通过0.45 μm的滤器过滤处理。

（3）细胞上清液的初步浓缩原则

1. 针对干细胞、神经细胞等外泌体分泌量少的细胞样品；
2. 可以使用10~100 KD之间的超滤管浓缩，浓缩倍数2~5倍。

（4）针对细胞上清液的外泌体提取原则：超离法、试剂盒法均可。

3.培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？

多数情况下，细胞在体外培养需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下几种方法：

（1）将细胞培养用的血清通过1×10⁵ g超速离心16 h以去除血清外泌体；

（2）选择无血清专用培养基(41210ES-Hieff® Serum-free Medium(for Exosome) 外泌体专用无血清培养基)进行细胞培养；

（3）选择去除外泌体血清进行培养。

4.无外泌体血清培养基(或者无血清专用培养基)在什么时候使用？

细胞在正常含血清的培养基中培养一定时间后，细胞融合度约为60%~70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基(或者无血清专用培养基)，继续培养24~48h，细胞融合度达到80%~95%左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。必须确保细胞可以正常生长/增殖。

5.细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取？

会的。在收获细胞时，应确定死亡细胞占比不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体。

6.超离后的外泌体如何进行除菌操作？

超速离心是个多步骤操作的实验，中间操作可能会带来细菌的污染，后期如果进行细胞共孵育实验或者动物实验，则除菌步骤则必不可少。

针对大量的外泌体，可用0.2 μm过滤器，适合1 mL以上的液体过滤；少量的外泌体，可用离心过滤柱(翌圣货号：41212ES)，适用0.5 mL以下的液体过滤。

7.外泌体的保存

虽然外泌体具有脂质双层膜结构，能很好的保护其包被的物质，但是分离获得的外泌体仍然需要低温保存。短期保存(一周之内)，4℃；长期保存，如果样品量较大，建议分装后保存于-20℃或-80℃冰箱。

8.外泌体检测时的直标蛋白有哪些？

频率最高的指标：CD63、TSG101、CD9和CD81；

常见指标：Alix、HSP70、flotillin和Syntenin；

其它指标：HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5、a-1AT等。

9.常见样品可以提取到多少外泌体？

样品类型	样本体积	NTA颗粒数 Particles/mL	粒径分布 nm	蛋白量 μg	RNA ng
细胞上清*	1 mL	108~109	90~130	1~2	0.1~0.4
血清/血浆	1 mL	1010~1011	60~100	400~500	5~10

备注：细胞上清为常见肿瘤细胞

10.外泌体蛋白质组学检测需要多少的样本量？

蛋白质组学检测需要准备200 μg的总蛋白。

11.外泌体荧光标记需要注意什么？

（1）无论通过哪种染料进行外泌体荧光标记，都需要在标记后去除溶液中的多余染料；

（2）简便的方法就是针对标记好后的外泌体重新再做一次外泌体的提取操作。