产品简介

 

本产品是一种专为悬浮体系规模化生产AAV而开发,产品是经过优化改造后的线性化聚乙烯亚胺（PolyethylenimineLinear,PEI）。本产品纯化学合成，不含动物源成分，细胞毒性低，具备广泛的AAV血清型适用性。本产品DNA荷载能力强、转染复合物比例低和复合物稳定性高，为大规模AAV生产提供便利。

本产品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供。

 

产品信息

 

货号	40824ES10/ 40824ES60/40824ES80
规格	10 mL /100 mL /1 L

 

组分信息

 

组分名称	40824ES10	40824ES60	40824ES80
Hieff Trans® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent-GMP	10 mL	100 mL	1 L

 

储存条件

 

2-8ºC保存，有效期2年。

 

转染操作流程

 

1.接种细胞

  根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为1-1.5E6 cells/mL，使第二天转染时细胞密度为2-3E6 cells/mL 为宜。

2.转染复合物配置(以1 L体系为例)

1）质粒与试剂比例：质粒（μg）与转染试剂（μL）为1:0.5-1:1。

2）质粒稀释：使用25 mL无血清培养基稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用25 mL无血清培养基稀释1 mL Hieff Trans® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent-GMP转染试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的25 mL质粒稀释液加入到25 mL转染试剂稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置20 mins，形成质粒-PEI复合物，备用。

表 1 转染复合物参数（仅供参考）

参数类型	推荐条件	条件范围
核酸用量（每百万细胞）	1 μg	0.5 μg-2 μg
核酸与转染试剂比例（μg:μL）	1:0.5	1:0.5-1:1
转染复合物体积（%培养体积）	5%	1%-10%
复合物孵育时间	20 mins	15 mins-60 mins
复合物介质（无血清等添加物）	无血清培养基	无血清培养基，PBS

3.转染细胞

1）直接将50 mL的质粒-PEI复合物均匀加入细胞中。

2）在37℃与5% CO₂条件下继续培养细胞，并在培养72 h后收获病毒。

图一 Hieff Trans^® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent-GMP转染试剂操作步骤示意图

 

表 2 不同细胞培养参数转染试剂用量（仅供参考）

细胞培养参数			转染参数
细胞密度	培养体积	总细胞数量	复合物体积	DNA用量	转染试剂体积
2E6 cells/mL	30 mL	6E7 cells	1.5 mL	60 μg	60 μL
	1 L	2E9 cells	50 mL	2 mg	2 mL
	100 L	2E11 cells	5 L	200 mg	200 mL
2.5E6 cells/mL	30 mL	7.5E7 cells	1.5 mL	75 μg	75 μL
	1 L	2.5E9 cells	50 mL	2.5 mg	2.5 mL
	100 L	2.5E11 cells	5 L	250 mg	250 mL

 

注意事项

 

1. 为提高转染效率，建议悬浮细胞在无血清培养体系中驯化几天后进行转染操作。

2. 转染过程中推荐使用高质量的质粒，如无内毒素、无蛋白和RNA残留的质粒。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

 

 

Ver.CN20250121