重磅!突破性AAV转染新神器——病毒滴度提高2倍!

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2024-05-27

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CGCS 2024(第五届)国际细胞与基因治疗中国峰会暨展览会于2024年5月22-24日在南京扬子江国际会议中心召开。翌圣生物研发科学家滕以刚博士受邀参加并在会议上进行了“翌圣生物新型PEI转染试剂在AAV大规模生产中的应用”的主题报告:为我们介绍了翌圣生物自主研发的新型Ultra PEI-AAV转染试剂,该产品专为悬浮体系中制备高滴度AAV而设计;翌圣生物的Ultra PEI-AAV转染试剂以其卓越的产品性能和高转染效率,AAV病毒滴度可提升2倍左右,有效降低了AAV制备成本

 

 

截至目前,共有14种体外基因疗法和29种体内基因疗法通过FDA获得批准。由于AAV具有低免疫原性、广泛的趋向性和非整合性等特点,腺相关病毒(AAV)载体已成为临床试验和 FDA 批准申请的首选[1]

 

 

 

AAV包装专用转染试剂,助您轻松提高AAV病毒产量!

 

 

 
高转染效率
 
针对不同AAV血清型均能获得极高的病毒滴度
 

Ultra PEI-AAV转染试剂与PEI及其他竞品相比,在悬浮293F细胞中分别生产AAV2/AAV5/AAV8/AAV9,可以大幅度提高AAV产量,且病毒产量显著高于竞品;针对不同血清型均有很高转染效率。

 

DNA用量为1ug/百万细胞,转染后72h收取病毒,检测病毒原液;转染试剂和质粒的比例均是按照1:1进行实验

 

 
低使用成本
 
更少的质粒及转染试剂仍能获得高滴度AAV
 

在悬浮体系中进行AAV病毒载体的大规模生产时,转染试剂和质粒的用量是影响生产成本的关键因素。Ultra PEI- AAV转染试剂,当质粒和转染试剂的使用量减少至一半,对病毒产量的影响较小,能够有效控制并降低大规模生产的成本。

 

 

在悬浮293F细胞中生产rAAV8,DNA用量分别为0.5 μg 、0.75 μg 、1 μg/百万细胞,转染后72 h收取病毒;转染试剂和质粒按照1:1进行试验

 

 

优化后复合物体积可低至1%,工艺放大更方便
 

在大规模瞬时转染中,转染复合物比例过高会给生产带来挑战。翌圣生物的Ultra PEI-AAV转染试剂经过工艺优化,成功将转染复合物体积降至1%,极大地便利了大规模AAV病毒载体的生产。优化后的转染复合物不仅易于制备,而且有效解决了传统大规模生产中因体积限制而带来的挑战,为AAV病毒载体的商业化生产提供了强有力的支持。

在悬浮293F细胞中生产rAAV8,转染72 h后收取病毒

 

 

复合物可稳定6 h以上,大规模生产更加便利
 

在大规模瞬时转染中,生产工艺往往要求在限定的时间内高效地制备大量的转染复合物,并将这些复合物加入到悬浮培养的细胞中,以实现高效的细胞转染。翌圣生物的Ultra PEI- AAV转染试剂与质粒结合形成的转染复合物,经过工艺优化后,能在6小时内保持高稳定性,同时不影响AAV病毒滴度,充分满足了大规模AAV制备的工艺需求,保证了生产过程的高效性和连续性。

 

在悬浮293F中生产AAV8,转染72 h后收取病毒

 

翌圣生物的Ultra PEI- AAV转染试剂在与市场上的主流产品相比时,具有以下显著优势

  • 病毒滴度显著提高:在病毒产量上实现了显著提升,对于AAV2、AAV5、AAV8和AAV9等多种血清型,均能实现2倍左右的病毒滴度增长。

  • 降低使用成本:该产品通过减少50%的DNA和转染试剂用量,仍然保持高产量,有效降低了生产成本。

  • 工艺放大更方便:转染复合物的体积经过优化后可降至1%,并且具有长达6小时的稳定性,这些特性共同为大规模AAV病毒载体的制备提供了极大的便利和成本效益

 

☎如需了解产品,请联系400-6111-883!

 

转染试剂选择指南

 

 

 

货号

40801ES

40802ES

40807ES

40809ES

40810ES

40821ES

40824ES

40825ES

40828ES

40829ES

40830ES

产品

名称

LipoBooster

3000转染试剂

Liposomal 2000脂质体转染试剂

RNAiBoost 转染试剂

mRNA

转染试剂

昆虫细胞

转染试剂

PEI -GMP

转染试剂

UltraAAV- GMP转染试剂

UltraLV

转染试剂

UltraProFect-CHO瞬转表达试剂盒

UltraProFect-293瞬转表达试剂盒

UltraProFect蛋白瞬转表达转染试剂

细胞

类型

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

昆虫细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

常规细胞

难转染

 

难转染

难转染

 

 

 

 

 

 

 

原代

 

原代

原代

 

 

 

 

 

 

 

干细胞

 

干细胞

干细胞

 

 

 

 

 

 

 

核酸

类型

DNA

DNA

 

 

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

DNA

siRNA

 

siRNA

 

 

 

 

 

 

 

 

miRNA

 

miRNA

 

 

 

 

 

 

 

 

ASO

 

ASO

 

 

 

 

 

 

 

 

mRNA

 

 

mRNA

 

 

 

 

 

 

 

应用

场景

用于各种核酸及原代等难转染细胞系

普遍用于多种细胞DNA转染

用于siRNA和miRNA转染,在多种难转染细胞上均能高表达

mRNA转染专用,在多种难转染细胞上均能高表达

针对sf9和High Five等昆虫细胞进行杆状病毒及质粒DNA转染

通用型病毒包装转染试剂(适用于LV及AAV)

AAV病毒包装专用转染试剂

LV慢病毒包装专用转染试剂

CHO悬浮细胞瞬转表达蛋白、抗体,含转染试剂、培养基、补料

293悬浮细胞瞬转表达蛋白、抗体,含转染试剂、培养基、补料

用于抗体、蛋白、细胞因子等瞬转表达,满足CHO及293悬浮细胞系需求

对标

竞品

thermo-lipo3000

thermo-lipo2000

thermo-RNAiMAX

thermo-Messenger

MAX

thermo-Cellfectin

polyplus-PEIpro GMP

polyplus-FectorVIR-AAV GMP/

PEIpro

polyplus-FectorVIR-LV/PEIpro

thermo-ExpiCHO

瞬转

试剂盒

thermo-Expi293

瞬转

试剂盒

polyplus-FectorPRO

   

 

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产品规格

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参考文献

[1] Wang JH, Gessler DJ, Zhan W, Gallagher TL, Gao G. Adeno-associated virus as a delivery vector for gene therapy of human diseases. Signal Transduct Target Ther. 2024 Apr 3;9(1):78. doi: 10.1038/s41392-024-01780-w. PMID: 38565561; PMCID: PMC10987683.

[2] Srivastava, A., Mallela, K. M. G., Deorkar, N. & Brophy, G. Manufacturing challenges and rational formulation development for AAV Viral vectors. J. Pharm. Sci.110, 2609–2624 (2021).

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