本产品是一种经过优化改造后的线性化聚乙烯亚胺（Polyethylenimine Linear, PEI），浓度为1 mg/mL。本产品纯化学合成，不含动物源成分，特别适合多质粒的共同转染，用于重组病毒载体的生产，以及重组蛋白的瞬时表达生产。本产品细胞毒性低、转染效率高、兼容抗生素，在HEK293等细胞中基因表达效率较高。

本产品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供。

 

运输与保存方法

运输方式：冰袋运输。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为提高转染效率，建议悬浮细胞在无血清培养体系中驯化几天后进行转染操作。

2）转染过程中推荐使用高质量的质粒，如不含内毒素的质粒。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

 

转染操作流程

一 悬浮细胞（以1 L体系为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天转染时细胞密度为2-3×10⁶ cells/mL为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1 - 1:3。

2）质粒稀释：使用50 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用48 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mL试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的50 mL试剂稀释液加入到50 mL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10-20 min，形成质粒-PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将100 mL的质粒-PEI复合物加入1 L培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

图1 转染操作步骤示意图

二 贴壁细胞（以10 cm培养皿为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞铺板密度为50-80 %，使第二天转染时细胞密度70-90 %为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1至1:3。

2）质粒稀释：使用250 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用242 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μL试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的250 μL试剂稀释液加入到250 μL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10-20 min，形成质粒-PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将500 μL的质粒-PEI复合物加入10 mL培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

表1 不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）

培养容器	表面积（cm2）	DNA稀释		转染试剂稀释		培养基 总量
		DNA量（μg）	稀释液体积（μL）	转染试剂量（μL）	稀释液体积（μL）
96孔板	0.3	0.1	5	0.1	5	100 μL
48孔板	0.7	0.2	10	0.2	10	200 μL
24孔板	1.9	0.5	25	0.5	25	500 μL
12孔板	3.8	1	25	1	25	1 mL
6孔板	10	2	50	2	50	2 mL
25 cm2培养瓶	21	4	100	4	100	4 mL
75 cm2培养瓶	58	8	250	8	250	10 mL
10 cm培养皿	60	8	250	8	250	10 mL

 

HB221014