Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2
CUT&Tag试剂盒（pA/G-Tn5版）

样本即用型试剂盒：含CUT&Tag实验中除样本和一抗和蛋白酶抑制剂以外的所有试剂，无需额外其他组分

 

产品应用

蛋白质-DNA互作研究：组蛋白修饰调控、转录因子调控等表观作用机制研究

产品优势

 

●含两种纯化磁珠：针对小片段纯化，回收效果更好。

●实验操作简单、实验周期短：建库一步法，节省建库时间；ConA使用，无需离心转管；无需超声片段化；样本投入量低。

●实验重复性好

产品描述

 

Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2 是针对Illumina^®高通量测序平台研发的用于CUT&Tag实验的文库构建试剂盒，适用于100-100,000个细胞起始量的样本建库。CUT&Tag是研究蛋白与DNA互作的技术，相较于传统的ChIP-seq、CUT&RUN，该技术具有文库构建时长更短（仅需7小时）、操作更简单、对起始样本要求更低、抗体投入量更少、文库产量更高等优点。经过细胞捕获、一抗孵育、二抗孵育、转座酶孵育、转座酶激活、掺入DNA标准品、细胞裂解、磁珠回收gDNA、文库扩增和磁珠分选等步骤，靶蛋白结合的DNA片段最终转化为适用于Illumina^®平台测序的文库。

本试剂盒包含两个独立模块：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含结合细胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文库纯化的DNA Selection Beads，BOX-II包含细胞透化剂、抗体结合buffer、转座酶结合buffer、蛋白酶K以及后续文库扩增所需的所有试剂。此外，本试剂盒已在不同种类细胞（如293T、K562、CHO、ESC细胞等）中进行了验证，均具有良好的建库效率和建库产量。本试剂盒提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库的稳定性和重复性。

实验数据

 

图  Qsep对不同细胞投入量文库质量分析：不同样本投入，CUT&Tag实验都能得到一致的结果

 

图：spike in 让数据分析结果更真实：Spike in校正后，不同投入量的样本，基因富集倍率更真实、更准确。
 

组分信息

 

组分编号			组分名称	12597ES04	12597ES12	12597ES48
BOX-I	12597-A	⇔	ConA Beads	40 μL	120 μL	480 μL
	12597-B	⇔	DNA Extract Beads	280 μL	840 μL	3.36 mL
	12597-C	⇔	DNA Selection Beads	400 μL	1.2 mL	4.8 mL
BOX-II	12597-D	⇔	10 × Binding Buffer	120 μL	360 μL	1.44 mL
	12597-E	⇔	10 × Wash Buffer	600 μL	1.8 mL	7.2 mL
	12597-F	⇔	5% Digitonin	45 μL	135 μL	540 μL
	12597-G	⇔	50 × PB Buffer	6 μL	18 μL	72 μL
	12597-H	⇔	10 × Dig-300 Buffer	400 μL	1.2 mL	4.8 mL
	12597-I	⇔	pA/G-Transposome Mix	8 μL	24 μL	96 μL
	12597-J	⇔	33× Activating Buffer	6 μL	18 μL	72 μL
	12597-K	⇔	15 × Terminate Solution	20 μL	60 μL	240 μL
	12597-L	⇔	30 × Proteinase K	10 μL	30 μL	120 μL
	12597-M	⇔	DNA Spike-in Mix (5 ng/μL)	4 μL	12 μL	48 μL
	12597-N	⇔	2×HiFi Amplification Mix	100 μL	300 μL	1.2 mL
	12597-O	⇔	Goat Anti-Rabbit lgG(H+L)*	2 μL	6 μL	24 μL
	12597-P	⇔	N5 (N501)**	4 μL	/	/
	12597-Q	⇔	N7 (N701)**	4 μL	/	/

注意：*本试剂盒中包含的二抗为山羊抗兔二抗，适用于使用一抗来源于兔源的研究，若需要一抗来源于鼠源的研究，需客户自行准备抗鼠二抗（Yeasen cat#34851ES）或其他等效产品。

**测序时 Index 序列 填写时，测序平台为NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500，则N501-CTCTCTAT，N701-TAAGGCGA。测序平台为NovaSeq 6000 v1.5 reagents，MiniSeq, NextSeq,HiSeq 3000/4000，则N501-ATAGAGAG，N701-TAAGGCGA。

***本试剂盒在实验前需自备蛋白酶抑制剂Cocktail（Yeasen Cat#20123ES）或其他等效产品。

 

存储条件

 

BOX-I：2-8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。