产品描述
RNA酶广泛存在环境中,很容易降解新鲜采取的动植物组织、血液、体液等样本中的RNA,从而使得研究人员在收集完新鲜样本需要做液氮速冻,或者立即进行RNA的纯化,这给研究人员的户外工作带来诸多不便。
RNAsafe动植物组织稳定液(RNAsafe Tissue Stabilizer)是专门开发用于稳定并保护采集样本内RNA,作为一种无毒溶液,可迅速渗入组织,灭活内源RNase。
产品特点
操作极其简便:只需要将新鲜组织切成合适大小(≤0.5 cm)的组织块,浸入5~10倍体积的RNAsafe中即可。
稳定周期长:经RNAsafe浸润的组织/细胞可在37℃保存1天,室温保存1周,4℃保存4周,-20℃/-80℃长期保存。
下游兼容性广:几乎兼容于所有的RNA分离方法,如HieffTM Total RNA Extraction Reagent(货号:10606ES60),以及几乎所
有的商业化RNA抽提试剂盒,包括离心柱抽提法,磁珠纯化法等。
材料应用性广:可用于多种动植物组织(如脑、心脏、肝脏、胰脏、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、植物的茎叶等)的保存,还可用于酵母、组织培养细胞等。
操作流程
1. 样品处理
A. 动物组织:RNAsafe稳定液不会破坏动物组织结构的完整性。
处理过程:将组织切成合适大小后(≤0.5 cm),然后加入5倍体积RNAsafe。
注:已浸入RNAsafe的组织经平衡一段时间后,可从溶液中取出,切成更小的组织块(≤0.5 cm大小),再重新放回RNAsafe。
注意:某些组织(如骨头)具有比较弱的液体渗透性,不适合用本品进行RNA保护。
B. 植物组织:本品对于柔软的植物组织(如嫩叶,嫩茎)可直接渗透,且达到理想的RNA保护效果。
处理过程:将组织切成合适的大小(≤0.5 cm)后,加入5倍体积的RNAsafe稳定液。
注:某些植物组织天生具有的屏障(如叶子表面的蜡层)可阻碍RNAsafe渗透,对于此类组织,往往需要破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。
C. 组培细胞、白细胞等:按照标准实验操作收集细胞沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后加入5~10倍体积的RNAsafe。
D. 酵母:离心弃上清,收集约108个细胞(12,000g,2 min)。加入0.5~1 mLRNAsafe。
长期保存:应置于RNAsafe中,4℃放置1小时。然后离心弃上清,收集酵母细胞(12,000g,5 min),-80℃保存。
2. 样品保存
A. -80℃保存:样品结冻保存。对于归档的样本,建议-80℃保存。该保存条件下,样本可长期保存,保护效果最佳。
操作过程:样本4℃浸透过夜,然后再转移至-80℃。
如果中间需要做样本的融化,建议取出4℃浸透过夜的组织或离心收集细胞,然后再冻存于-80℃。RNAsafe保护后的样本抽提RNA时,可直接放在室温融化,之后重新冻上,不会造成RNA量的严重损失或者RNA完整性的明显破坏。
B. -20℃保存:同样适用于归档样本的保存。样本不会在-20℃结冻,但可能会形成结晶。该保存条件下,样本可长期保存,不会对后续RNA分离造成影响。
操作过程:样本4℃浸透过夜,然后再转移至-20℃。RNAsafe保护后的样本抽提RNA时,可直接放在室温融化,之后重新冻上,不会造成RNA量的严重损失或者RNA完整性的明显破坏。
C. 4℃保存:大部分样品放到RNAsafe中,可稳定保护1个月,不会有明显的RNA降解发生。
D. 25℃(室温)保存:建议低温环境保存。若条件不允许,请将RNAsafe稳定液于冰上冷却几个小时,然后将样品浸入此溶液中,室温稳定保存1周,不会有明显的RNA降解发生。
E. 37℃保存:纯化的RNA样本于37℃孵育24 h,结构依然完整。
3. RNA提取
因RNAsafe灭活RNase的过程是可逆的,受保护的样本使用前务必不要清洗掉RNAsafe。
A. 组织样本:用灭菌镊子从RNAsafe中取出组织块,然后用干净的吸水纸吸掉表面液体。之后立即置于裂解液中匀浆。
B:细胞样本:由于RNAsafe密度较大,此时需要使用大于普通介质的离心力。一般来说,保存在RNAsafe中的细胞能承受更高的转速,并维持细胞的完整性。大部分细胞可通过5,000g,5 min离心收集沉淀。
注意:由于不同细胞承受离心力会有差异,建议先用少量的细胞进行离心速度承受性的测试。
C. 抽提RNA:按照RNA抽提Protocol进行即可。
运输与保存方法
室温运输,室温保存,有效期5年。
注意事项
1. 经RNAsafe处理的样本还可做基因组DNA的提取,甚至蛋白质的提取。但由于RNAsafe会变性蛋白质,因此不适合天然蛋白的提取。
2. 本RNAsafe室温保存过程中可能会产生一些沉淀,在使用前只需放到37℃温育片刻,并间断摇晃重溶,不影响使用。
3. 本RNAsafe仅适用于新鲜组织,不可用于冰冻组织。若需要保护冰冻组织内RNA的完整性,可使用我司的RNAsafe-ICE冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液(货号:10605ES60),即可将冰冻组织恢复为匀浆用的组织状态,并进行RNA抽提的过程中,维持RNA的稳定性。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途!
相关产品
产品名称 |
货号 |
规格 |
10605ES60 |
100 mL |
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10401ES60/80 |
100 mg/1 g |
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10402ES08/50 |
5/50 g |
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10403ES81/88/ 92 |
1500/3000/10000 U |
|
10404ES08/10 |
5/10 g |
|
10606ES60 |
100 mL |
HB210722