CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium（Serum-free）培养基为无动物源、无蛋白的完全化学成分限定培养基。适应于HEK293各细胞系细胞（如HEK293F，HEK293T，HEK293H，Expi293 等）规模化无血清悬浮培养及后续转染表达。产品经过定向优化，尤其适应于AAV及蛋白等相关产品研发和生产过程，可支持细胞高密度扩增及稳定的产物表达。对HEK293各细胞类型具有广泛的适应性。为了适应不同培养体系及生产工艺，配套培养基产品提供对应补料，同时也可匹配其他商业化补料产品。

 

运输与保存方法

冰袋运输。2～8℃，避光保存，有效期1年。

 

使用方法

一、标准参数

参数	设定值
50mL TPP 管	培养体积： 10-20 mL
125~1000mL 摇瓶	培养体积： 摇瓶总体积的 20~30%
摇床转速	TPP：转速 220Rpm,  摇瓶 110-130 Rpm
摇床振幅	50mm
培养基	CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium（Serum-free）
接种密度	0.5×106 cells/mL
培养温度	37℃
CO2%	5%
相对湿度	80%RH

二、培养基的适应

通常，在原用培养基中生长的HEK293细胞需要转移到由50%原用培养基和50%培养（CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium）组成的新培养基中进行适应性生长。

1. 细胞传代当天，取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×10⁶细胞/mL）和细胞活率（%）。将原用培养基中生长的细胞移入新培养基*（50%CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium+ 50%原用培养基），接种密度为0.5×10⁶/mL，传代后按照规定的环境条件培养细胞。

2. 细胞培养至48±3小时后，建议按此方法进行至少3次细胞适应性传代。当细胞活率高于90%时转入100% CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium培养基培养。

三、 细胞传代和扩增

1. 37℃水浴中预热CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium 培养基。

2. 使用75%酒精清洁/消毒生物安全柜。

3. 使用75%酒精喷洒培养基瓶，并置于生物安全柜。

4. 从培养箱中取出摇瓶（或TPP管），喷洒75%酒精并置于生物安全柜。

5. 接种密度为1.0×10⁶ viable cells/mL。培养48±3小时后，取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×10⁶细胞/mL）和活细胞（%）。

6. 传代前，如果细胞密度低于2.0 ×10⁶/mL，或细胞活率低于80%，需要150g - 300g（大约800 rpm~1200 rpm）离心5分钟处理细胞。轻轻弃上清，使用100%新鲜培养基按0 .5×10⁶/mL重悬细胞，并将细胞接种至新摇瓶（或TPP管），传代后按照规定的环境条件培养细胞。

7. 如果传代前细胞密度大于2.0×10⁶/mL且活细胞率高于85%，则将适量的细胞悬液转移到新摇瓶（或TPP管）中，并用新鲜培养基直接调整最终培养体积进行细胞传代，然后在规定的环境条件下培养细胞。

如果传代比（传代后的种子密度：传代前的细胞密度）大于1:4，细胞需要离心并重新悬浮在100%新鲜培养基中。

四、细胞冻存

1. 细胞冷冻前，将含新鲜异丙醇的程序降温盒、冻存管等所需材料置于4℃冰箱中，预冷至少24小时后冷冻保存，或在-20℃下放置2小时~4小时后冷冻保存。

2 取样计数，检测分析活细胞密度（×10⁶细胞/mL）和细胞活率（%）

注：冻存培养基 ：20% DMSO+80% CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium

3 根据冻存细胞的数量、冻存体积和冻存密度（建议冻存密度为10 - 20×10⁶ /mL/支），

计算所需的细胞量，并移入离心管中，以800 rpm - 1500 rpm（即150 g - 300 g）离心5min。

4 弃上清液，拍打离心管底部使细胞均匀分散，加入冻存体积一半的生长培养基，轻轻吹打细胞，形成均匀的细胞悬液，见下表（示例及根据传代数据选择哪种培养基）：

培养基	成分	体积	终培养基
冻存培养基	20% DMSO+80% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium	10mL	10% DMSO+90% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium
生长培养基	CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium	10mL

用无菌移液管转移相同体积的冻存培养基（含20% DMSO），逐滴加入细胞悬液中。加入冻存培养基时，轻轻摇动离心管，保持细胞密度均匀；

5 用一次性无菌移液管将1mL - 1.5mL细胞冻悬液移入预冷冻存管中，置于冰上保存；

6  冻存细胞悬液在分装过程中需要反复混合。分装完成后，将冻存管转移至预冷的程序降温盒中，在-80℃冰箱中至少保存24小时；

7  转移至液氮罐中继续保存。

五、细胞复苏

1  D0复苏细胞

2  使用75%酒精清洁/消毒生物安全柜。

3  37℃水浴中预热CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium 培养基；

4  使用75%酒精喷洒培养基瓶，并置于生物安全柜；

5  从液氮罐中取出冻存管，并置于干冰上；

6  复苏1支细胞，并在37℃水浴中，轻轻晃动冻存管，解冻1分钟；

7 用75%酒精喷洒冻存管外壁；

8  用无菌移液管将冻存管中的细胞轻轻移到含有30 mL预热培养基（CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium）的离心管中。如有必要，使用预热的培养基（CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium）冲洗冻存管中的细胞；

9  150g - 300g（约800rpm - 1200rpm）离心5分钟，丢弃上清液并将细胞重悬于10 ~ 30mL新鲜预热培养基（CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium）中，然后使用预热培养基（CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium）在摇瓶中将细胞密度调节至0.5×10⁶cells/mL；

10 取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×10⁶/mL）和细胞活率（%）。

11 如果细胞活率＞85%，将细胞置于规定的环境条件下培养细胞

12 传代、扩大培养细胞。

6、蛋白表达，腺相关病毒病毒等在悬浮293细胞（293F、293T、293H、Expi293）上的表达

1  细胞在CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium中培养；

2  72±3 小时后，取 0.5mL 细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×10⁶/mL）和细胞活率（%）；

3  用相同体积的预热 CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium 培养基稀释培养物（培养物体积：待添加的CelCulSF^TM 293 Cell Culture Medium 培养基体积=1:1）；

4  根据病毒培养工艺，接种病毒，并继续培养病毒至收获。可根据实际生产工艺进行优化或联系产品相关负责人。

 

注意事项

1. 细胞应及时传代。如果细胞密度很高，会导致细胞状态下降，死亡细胞增多，细胞碎片增多，细胞聚集；

2. 液体细胞培养基不宜长时间光照或热照，应避光保存在2～8℃。

3. 液体培养基中含有6mM  L-谷氨酰胺，长期未使用建议使用前添加2-3mM  L-谷氨酰胺。

HB230321