Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。

经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。

本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达10⁵-10⁶个。

冰袋运输。 4℃保存，有效期12个月。-20℃保存，有效期24个月，建议分装避免反复冻融。

Q：Hoechst33342/PI双染试剂盒原理及结果判断？

A：Hoechst33342/PI主要是区分凋亡细胞和坏死细胞的，细胞发生凋亡时，染色质会固缩。Hoechst33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。

正常细胞：弱红色荧光＋弱蓝色荧光

凋亡细胞：弱红色荧光＋强蓝色荧光

坏死细胞：强红色荧光＋弱蓝色荧光

Q: Hoechst 33342/PI 双染试剂盒中两种染料浓度是多少？

A: Hoechst：1mg/mL, PI浓度：200ug/mL。

Q: Hoechst 33342在4度还是37度染色合适？

A: Hoechst 33342在37度染色更合适，4度染色可能导致细胞核不能被完全染色。