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产品描述
Hoechst 33258(赫斯特荧光染色液)是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10 μg/mL。
产品性质
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中文名称（Chinese Synonym） |
二苯甲亚胺, 三氯化氢 2'-(4-羟基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5'-二-1H-苯并咪唑 |
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英文名称（English Synonym） |
2’-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole,Trihydrochloride；bisBenzimide H 33258; HOE 33258 |
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分子式（Molecular Formula） |
C25H24N6O·3HCl |
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分子量（Molecular Weight） |
533.88 |
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CAS号（CAS NO.） |
23491-45-4 |
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荧光光谱（Fluorescence Spectral） |
Hoechest 33258的Ex/Em=346/460; Hoechest 33258-核酸的 Ex/Em=350/460; 荧光可用氙气灯，泵弧灯或者UV激光激发；可用DAPI滤光器、蓝色GFP滤光器、Alexa Fluor 350滤光器等检测。 |
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纯度（Purity） |
≥95%（HPLC） |
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结构（Structure） |
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运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。
配制母液
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10 mg/mL。因此可用无菌超纯水配制成1-5 mg/mL的储存液于4℃避光保存。使用时用PBS或者其他合适缓冲液将其稀释成0.5-10 μg/mL工作液。
注：Hoechst 33258溶于PBS或者其他缓冲液时会有沉淀产生，因此不能用上述缓冲液进行储存液的配制。
注意事项
1）Hoechst 33258 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 用PBS或合适的缓冲液制备0.5-10 μg/mL Hoechst 33258染色液。
2. 固定的细胞或组织染色：
a）对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
b）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c）吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。
3. 活细胞或组织染色：
a）细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。
b）在 37℃培养细胞 10～20 分钟。
c）用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。
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