产品简介

 

Catalase Assay Kit 过氧化氢酶检测试剂盒是一种简单快速、可通过测试吸光度来检测动物血清、血浆、组织以及全血、红细胞、培养细胞、培养液中的过氧化氢酶（CAT）的活力。过氧化氢酶（CAT）催化H₂O₂分解为水和氧气，当加入钼酸铵后，反应迅速终止，剩余的H2O2与试剂盒中的钼酸铵发生络合反应，得到淡黄色的产物。这个黄色产物的最大吸收波长是405 nm 。所以，可以通过检测405 nm处的吸光度，来测定样品中的过氧化氢酶（CAT）的活力。

羟基自由基（OH^-）是很活泼的活性氧，它能与细胞内的许多有机物、核酸、有机酸等等发生氧化反应，破坏性极强。过氧化氢酶（CAT）广泛分布在血清、血浆、红细胞等中，能分解活性氧，保护细胞免受破坏，因而测定过氧化氢酶（CAT）的活力至关重要。

 

产品信息

 

货号	50108ES60
规格	100 T

 

组分信息

 

组分名称	50108-A（试剂一）	50108-B（试剂二）	50108-C（试剂三）	50108-D（试剂四）
规格	100 mL	10 mL	7 g	10 mL

 

储存条件

 

2～8 ℃避光保存，保质期6个月。

 

使用说明

 

1. 溶解试剂三：向试剂三（显色粉剂）中加入100 mL的双蒸水溶解；放入2～8℃冰箱避光保存。（如果底部有不溶的粉末沉淀，直接取上清即可，不影响实验结果）
2. 预热：实验之前，先将试剂盒中的试剂一和试剂二放在37 ℃水浴锅中预热10～20 min，以备后用。
3. 加样品，检测吸光度：

1. 血清、血浆样本吸光度检测：

血清、血浆样本
	实验组	对照组
试剂一（37 ℃预热）	1.0 mL	1.0 mL
试剂二（37 ℃预热）	0.1 mL	0.1 mL
血清/血浆	0.1 mL
混匀后，在37 ℃中准确加热1 min（注意：一定要准确加热反应1 min），然后加试剂三和试剂四；
试剂三	1.0 mL	1.0 mL
试剂四	0.1 mL	0.1 mL
血清/血浆		0.1 mL
混匀，在光径为0.5 cm，波长为405 nm处，双蒸水调零，检测吸光度。

2. 全血、红细胞样本吸光度检测：

1) 1：99溶血液配制：向50 μL全血或红细胞样本中加双蒸水至5 mL，混匀，放置10 min，待测；

2) 检测吸光度：

全血、红细胞样本
	实验组	空白对照组	自身对照组
蒸馏水		0.05 mL	2.1 mL
1：99溶血液	0.05 mL		0.05 mL
试剂一（37 ℃预热）	1.0 mL	1.0 mL
试剂二（37 ℃预热）	0.1 mL	0.1 mL
混匀后，在37 ℃中准确加热1 min（注意：一定要准确加热反应1 min），然后加试剂三；
试剂三	1.0 mL	1.0 mL
混匀，在光径为0.5 cm，波长为405 nm处，双蒸水调零，检测吸光度。

3. 组织样本吸光度检测：

1) 组织匀浆液制备：按组织重量（g）：生理盐水体积（mL）=1:9的比例，在冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500 r/min离心10 min，取上清；再用生理盐水稀释到最佳取样浓度，一般稀释成：5%、2%、1%、0.5%、0.25%、0.1%等不同的取样浓度，其中小鼠肝脏匀浆取样浓度为0.25%～1%。

2) 检测吸光度：

组织样本
	实验组	对照组
试剂一（37 ℃预热）	1.0 mL	1.0 mL
试剂二（37 ℃预热）	0.1 mL	0.1 mL
组织匀浆	0.05 mL
混匀后，在37 ℃中准确加热1 min（注意：一定要准确加热反应1 min），然后加试剂三和试剂四；
试剂三	1.0 mL	1.0 mL
试剂四	0.1 mL	0.1 mL
组织匀浆		0.05 mL
混匀，在光径为0.5 cm，波长为405 nm处，双蒸水调零，检测吸光度

4. 过氧化氢酶活力计算

1. 血清、血浆中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫升血清或血浆每秒钟分解1 μmol H₂O₂的量为一个活力单位）

血清中过氧化氢酶活力（U/mL）=（对照组OD值－实验组OD值）××样本测试前稀释倍数

 

2. 血红蛋白中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫克血红蛋白每秒钟分解1 μmol H₂O₂的量为一个活力单位）

溶血液中过氧化氢酶活力（U/mgHb）=（空白对照组OD值＋自身对照组OD值－实验组OD值）×

÷血红蛋白浓度（mgHb/mL）

3. 
   组织匀浆中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫克组织蛋白每秒钟分解1 μmol H₂O₂的量为一个活力单位）

组织匀浆中过氧化氢酶活力（U/mgprot）=（对照组OD值—实验组OD值）×      ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/mL）

注意事项

1. 加入试剂一和试剂二之前，要进行37 ℃预热。
2. 试剂三溶解、保存后，使用前有沉淀，直接取上清即可，不影响实验结果。
3. 当天冷时试剂四会凝固，使用前37 ℃水浴加热至透明即可。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20231025