Catalase Assay Kit 过氧化氢酶检测试剂盒是一种简单快速、可通过测试吸光度来检测动物血清、血浆、组织以及全血、红细胞、培养细胞、培养液中的过氧化氢酶(CAT)的活力。过氧化氢酶(CAT)催化H2O2分解为水和氧气,当加入钼酸铵后,反应迅速终止,剩余的H2O2与试剂盒中的钼酸铵发生络合反应,得到淡黄色的产物。这个黄色产物的最大吸收波长是405 nm 。所以,可以通过检测405 nm处的吸光度,来测定样品中的过氧化氢酶(CAT)的活力。
羟基自由基(OH-)是很活泼的活性氧,它能与细胞内的许多有机物、核酸、有机酸等等发生氧化反应,破坏性极强。过氧化氢酶(CAT)广泛分布在血清、血浆、红细胞等中,能分解活性氧,保护细胞免受破坏,因而测定过氧化氢酶(CAT)的活力至关重要。
组分信息
组分名称 | 50108-A(试剂一) | 50108-B(试剂二) | 50108-C(试剂三) | 50108-D(试剂四) |
规格 | 100 mL | 10 mL | 7 g | 10 mL |
使用说明
- 溶解试剂三:向试剂三(显色粉剂)中加入100 mL的双蒸水溶解;放入2~8℃冰箱避光保存。(如果底部有不溶的粉末沉淀,直接取上清即可,不影响实验结果)
- 预热:实验之前,先将试剂盒中的试剂一和试剂二放在37 ℃水浴锅中预热10~20 min,以备后用。
- 加样品,检测吸光度:
A. 血清、血浆样本吸光度检测:
血清、血浆样本 | ||
实验组 | 对照组 | |
试剂一(37 ℃预热) | 1.0 mL | 1.0 mL |
试剂二(37 ℃预热) | 0.1 mL | 0.1 mL |
血清/血浆 | 0.1 mL | |
混匀后,在37 ℃中准确加热1 min(注意:一定要准确加热反应1 min),然后加试剂三和试剂四; | ||
试剂三 | 1.0 mL | 1.0 mL |
试剂四 | 0.1 mL | 0.1 mL |
血清/血浆 | 0.1 mL | |
混匀,在光径为0.5 cm,波长为405 nm处,双蒸水调零,检测吸光度。 |
B. 全血、红细胞样本吸光度检测:
1) 1:99溶血液配制:向50 μL全血或红细胞样本中加双蒸水至5 mL,混匀,放置10 min,待测;
2) 检测吸光度:
全血、红细胞样本 | |||
实验组 | 空白对照组 | 自身对照组 | |
蒸馏水 | 0.05 mL | 2.1 mL | |
1:99溶血液 | 0.05 mL | 0.05 mL | |
试剂一(37 ℃预热) | 1.0 mL | 1.0 mL | |
试剂二(37 ℃预热) | 0.1 mL | 0.1 mL | |
混匀后,在37 ℃中准确加热1 min(注意:一定要准确加热反应1 min),然后加试剂三; | |||
试剂三 | 1.0 mL | 1.0 mL | |
混匀,在光径为0.5 cm,波长为405 nm处,双蒸水调零,检测吸光度。 |
C. 组织样本吸光度检测:
1) 组织匀浆液制备:按组织重量(g):生理盐水体积(mL)=1:9的比例,在冰水浴条件下,制备成10%的组织匀浆,2500 r/min离心10 min,取上清;再用生理盐水稀释到最佳取样浓度,一般稀释成:5%、2%、1%、0.5%、0.25%、0.1%等不同的取样浓度,其中小鼠肝脏匀浆取样浓度为0.25%~1%。
2) 检测吸光度:
组织样本 | ||
实验组 | 对照组 | |
试剂一(37 ℃预热) | 1.0 mL | 1.0 mL |
试剂二(37 ℃预热) | 0.1 mL | 0.1 mL |
组织匀浆 | 0.05 mL | |
混匀后,在37 ℃中准确加热1 min(注意:一定要准确加热反应1 min),然后加试剂三和试剂四; | ||
试剂三 | 1.0 mL | 1.0 mL |
试剂四 | 0.1 mL | 0.1 mL |
组织匀浆 | 0.05 mL | |
混匀,在光径为0.5 cm,波长为405 nm处,双蒸水调零,检测吸光度 |
4. 过氧化氢酶活力计算
A. 血清、血浆中过氧化氢酶(CAT)活力计算(每毫升血清或血浆每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位)
血清中过氧化氢酶活力(U/mL)=(对照组OD值-实验组OD值)××样本测试前稀释倍数
B. 血红蛋白中过氧化氢酶(CAT)活力计算(每毫克血红蛋白每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位)
溶血液中过氧化氢酶活力(U/mgHb)=(空白对照组OD值+自身对照组OD值-实验组OD值)×÷血红蛋白浓度(mgHb/mL)
C. 组织匀浆中过氧化氢酶(CAT)活力计算(每毫克组织蛋白每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位)
组织匀浆中过氧化氢酶活力(U/mgprot)=(对照组OD值—实验组OD值)× ÷待测样本蛋白浓度(mgprot/mL)
注意事项
- 加入试剂一和试剂二之前,要进行37 ℃预热。
- 试剂三溶解、保存后,使用前有沉淀,直接取上清即可,不影响实验结果。
- 当天冷时试剂四会凝固,使用前37 ℃水浴加热至透明即可。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途!
2~8 ℃避光保存,保质期6个月。
Q: 试剂的4个组分分别是什么?
A:试剂一是缓冲液,试剂二是底物,试剂三是显色剂,试剂四是稳定剂。
Q:如果客户检测的样本是培养的细胞,细胞裂解后的裂解液可以按照组织匀浆的加样比例做吗?不能的话有没有培养细胞的检测方法?
A: 如果检测的样本是培养的细胞,细胞裂解后的裂解液可以按照组织匀浆的加样比例。
Q:组织匀浆的检测中,为什么对照组还需要加组织匀浆,而不是直接加水?
A:对照组也需要按照步骤添加组织的样本,排除样本自身的干扰。
Q: 双蒸水调零是什么意思?
A: 分光光度计比色皿装水调零。
Q:血清血浆检测需要稀释吗?使用什么稀释呢?
A:直接检测就可以。
Q:使用什么仪器进行检测呢?
A:使用分光光度计或者反应之后取200ul用酶标仪检测。
Q: 这个光径0.5cm 是什么意思?
A: 这里的光径0.5cm是指比色皿规格是0.5cm*1cm的。
Q: 如果是酶标仪该怎么设置?
A: 如果是酶标仪就不用设置光径和双蒸水调零这么复杂。只需要405nm检测就可以了。
Q:酶标仪检测结果,计算公式还是按照说明书的公式吗?
A:计算公式中的常数271需要更改为常数235.65,其余的不需要改变。