化合物/化合物库,如何配置?——小分子化合物使用指南
Yeasen提供海量的抑制剂或生化试剂等小分子化合物供大家选择,这个产品大部分上都属于化学品化合物,拿到手的基本上都是粉末或晶体状态的一个固体物质,那么很多小伙伴就会有疑问,这个固体的物质,我要如何使用呢?要如何溶解配置呢?下面我们就针对2种主要形式的化合物:1.单独的一瓶化合物(瓶装形式) 2.化合物库(板装形式),整理了一份小分子化合物溶解使用的指南大全,供小伙伴们参考。
离 心
产品拿到手,使用前务必将产品进行离心操作,保证产品集中在底部,以免造成不必要的损失。
分 装
根据实验需要对母液或粉末进行分装。以液体产品为例,可以分装成10 μL。分装后的母液或粉末可以在-20℃或-80℃保存1-2年(建议-80℃)。部分溶剂为乙醇 (EtOH) 的产品,由于乙醇易挥发,建议尽快使用,否则,可能导致溶液体积损失。
母液信息
化合物
我们提供的化合物大部分为固体状态,可根据产品溶解性质溶解在对应的溶剂中。
例1:大部分化合物难溶于水,易溶于DMSO,可用纯DMSO(建议选用先开封的DMSO,避免DMSO久置吸潮,影响产品性能)溶解产品,配置成终浓度为10 mM的母液,根据单次取用量分装,置于-80℃保存,避免反复冻融;然后再次使用时,可将10 mM母液,用纯DMSO稀释成2 mM或1 mM临时母液,可于2~8℃短暂保存(建议不超过1周),然后可参照下述“水中溶解性较差的化合物“的稀释方式进行梯度稀释。
例2:若化合物易溶于水,用水溶解化合物后,建议现配现用,不建议久置,可能会影响产品性能;如必需要配置,可考虑用水(或其他适配的缓冲液)配置成10 mM的母液,置于-80℃保存(不能长期放置),尽快使用。
化合物库
我们提供的化合物库母液浓度为10 mM, 部分难溶化合物 (Insoluble in H2O/EtOH/DMSO) 提供DMSO或其他溶剂悬浊液。溶剂信息详见分子库的表格Solvent列。化合物溶解情况详见表格Solubility列。若未在产品页面中找到溶解度信息,或出现难溶情况,可采用超声震荡助溶或水浴加热(一般不超过60~65℃,具体情况根据化合物本身确定)辅助溶解;仍有问题可联系翌圣Yeasen销售人员。
工作液的配制
水溶剂母液稀释
可溶于水溶剂的化合物(水中溶解性好的化合物)可直接用培养基/PBS/ddH2O等稀释至工作液浓度即可。
对于不溶于水的化合物(水中溶解性较差的化合物)需梯度稀释
稀释核心是通过梯度降低DMSO/乙醇等有机溶剂浓度,避免因水性环境骤变导致化合物析出,同时确保最终体系中化合物稳定溶解且有机溶剂浓度在安全范围内。
以溶剂:DMSO为例:
(1)步骤1:稀释至1 mM(第一步,保留较高DMSO)操作:
1.1 取1.5 mL无菌低吸附离心管(防化合物吸附),标记“1 mM”。
1.2 加入45 μL 含 10% DMSO 的稀释液(稀释液为实验最终使用的水性溶液,如培养基,提前加入10% DMSO混匀)。
1.3 精准移取5 μL 10 mM母液,加入上述离心管中。
1.4 涡旋振荡15 s,充分混匀(此时溶液浓度=10 mM×5 μL/(5+45)μL=1 mM)。
【注】检查:溶液应澄清,无沉淀/浑浊(若析出,需提高稀释液中DMSO至15%~20%,重新操作)。
【注】DMSO浓度:步骤1后:母液是100% DMSO,5 μL母液含5 μL DMSO;45 μL稀释液含10% DMSO,即4.5 μL DMSO。总DMSO=9.5 μL,浓度19%。
(2)步骤2:稀释至100 μM(第二步,降低DMSO比例)
目的:进一步稀释,同步降低DMSO浓度,仍维持一定溶解度。
操作:
2.1 另取离心管,标记“100 μM”。
2.2 加入90 μL含1% DMSO的稀释液(用最终水性溶液加入1% DMSO配制,降低DMSO比例)。
2.3 移取10 μL 1 mM溶液(步骤1制备)加入管中,涡旋振荡15 s(浓度=1 mM×10 μL/100 μL=100 μM)。
【注】检查:溶液应澄清,无沉淀/浑浊(若析出,可将稀释液DMSO提高至2%~3%,重新操作)。
【注】DMSO浓度:步骤2后:取10 μL 1 mM 溶液(含19% DMSO,即1.9 μL DMSO),加入90 μL含1% DMSO的稀释液(0.9 μL DMSO)。总DMSO=2.8 μL,浓度2.8%。
(3)步骤3:稀释至10 μM(第三步,接近最终体系)
目的:得到目标浓度,DMSO终浓度接近最终体系水平。
操作:
3.1 另取离心管,标记“10 μM”。
3.2 加入90 μL纯稀释液(即实验最终使用的水性溶液,不含额外DMSO)。
3.3 移取10 μL 100 μM溶液(步骤2制备)加入管中。涡旋振荡15 s(浓度= 100 μM×10 μL/100 μL=10 μM)。
【注】检查:溶液应为澄清状态,无沉淀/浑浊。
【注】DMSO浓度:步骤3后:取10 μL 100 μM 溶液(含2.8% DMSO,即0.28 μL DMSO),加入90 μL纯稀释液(0 μL DMSO)。总DMSO=0.28 μL,浓度0.28%(≤0.5%,安全)。
DMSO母液稀释
需控制工作液中DMSO终浓度,并设置相同浓度DMSO对照组。
采用分段稀释法(如10倍梯度),避免浓度骤变导致化合物析出。
例子1:
1. 取1 μL 10 mM母液,加入99 μL无血清培养基,稀释至100 μM;
2. 取10 μL 100 μM溶液,加入90 μL细胞培养基,终浓度为10 μM。
【注】若稀释中出现析出,可通过超声复溶。
【注】适用在水里面溶解度较好的化合物。
例子2:
1. 取2 μL 10 mM母液,加入8 μL表格里面相匹配的溶剂(假设以溶剂是DMSO为例),则加入8 μL DMSO,稀释至2 mM;此时2 mM溶液也可以作为临时母液保存;
2. 取上述1 μL 2 mM溶液,加19 μL无血清培养基,稀释至100 μM;
3. 取上述10 μL 100 μM溶液,加入90 μL细胞培养基,终浓度为10 μM。
【注】若稀释中出现析出,可通过超声复溶。
【注】适用在水里面溶解度较差的化合物。
注意事项
1. 以上溶解使用方法仅供参考,如遇具体的实验环境,请根据实际需求进行适当调整。
2. DMSO对细胞有一定毒性,终浓度需控制。
3. 建议母液分装,避免反复冻融,否则可能影响产品稳定性。
4. 稀释后的溶液建议现配现用,不宜久置,否则可能影响实验效果。
5. 溶解配制时充分混匀,确保化合物均匀分布。
6. 建议设置DMSO(或其他对应溶剂)空白对照,排除DMSO(或其他对应溶剂)本身影响。使用时遵循上述离心、分装、稀释步骤,根据实验需求调整浓度和处理时间。
7. 具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。
8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
9. 产品溶解前请先短暂离心,以保证产品集中在容器底部。
10. 避光低温干燥保存,避免反复冻融。
11. 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。
12. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。


