直接PCR(Direct PCR)使用未纯化的样本进行PCR扩增,是一种不经核酸提取且无需核酸纯化步骤,直接使用动物或植物组织等直接进行扩增的反应,为DNA扩增带来前所未有的便捷。
翌圣直接PCR试剂盒(Direct PCR Kit)可直接对植物、动物组织,血液等原始样本进行PCR扩增,无需核酸纯化,极大简化PCR实验流程。从样本开始,以未经基因组纯化的微量原始样本(图1-A)或其裂解产物(图1-B)作为模板,进行PCR-based Genotyping(见图1)。与常规PCR-based Genotyping相比,直接PCR 试剂盒样本用量少,操作简单,实验成本低,可高通量化样本检测。
A. 直接法:取少量样本直接加入到PCR Master Mix中,进行PCR鉴定。
B. 裂解法:样本取样后,加入裂解液中,裂解释放基因组,取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中,进行PCR鉴定。
动物基因扩增检测、转基因动物基因分型,转基因植株鉴定、植物基因分型等。
快速:10min完成模板制备,最少50min完成PCR反应;
简便:样品无需剪碎或研磨即可完成裂解
PCR Mix为预混液形式,减少加样步骤;
多动物通用型:Animal Tissue Direct PCR Kit
图3.动物组织直接PCR试剂盒检测基因敲除动物组织直扩结果。M:100bp DNA ladder。1-8:以裂解产物为模板。+:以50ng纯化基因组DNA为模板。﹣:以去离子水为模板。循环数:35个循环。单条带(580bp):敲除动物纯合子基因组。单条带(180bp):野生型基因组。两条带(580bp/180bp):敲除动物杂合子基因组。
啮齿类专用型:Mouse Tissue Direct PCR Kit
图4.小鼠组织直接PCR试剂盒不同裂解时间直扩结果。M:100bp DNA ladder。+:以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数:35个循环。
优于常规碱裂解方法
图5.鼠尾经不同裂解方式处理后的直扩结果。检测基因:SOX21。M:100 bp DNA ladder。1-2:以常规碱裂解方式处理裂解产物为模板。3-4:以小鼠组织直接PCR试剂盒裂解产物为模板。+:以50 ng纯化基因组DNA为模板。﹣:以去离子水为模板。循环数:35个循环。
对比同类产品
图6.鼠尾经不同品牌同类产品裂解处理后的直扩结果。检测基因:SOX21。M :100 bp DNA ladder。+ :以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数:35个循环。
植物类专用型:Plant Tissue Direct PCR Kit
图7. 不同类型植物叶片直扩结果。M:100 bp DNA ladder。C:相应植物纯化基因组DNA为模板。1-2:叶片组织裂解产物为模板。循环数:30个循环。
图8.北京基石生命科技有限公司用户使用鼠尾直接PCR试剂盒进行小鼠基因型鉴定结果
图9.华中农业大学用户使用植物直接PCR试剂盒扩增水稻相关基因
Q2 裂解时间过长,但是组织没有裂解完全,有影响吗?处理裂解组织时,是不是每一步都需要离心?
A:裂解不完全是正常现象,不影响使用;每一步都要离心,这样能避免溶液混合不均匀。
Q3 小鼠组织直接PCR是鼠趾好还是鼠尾好?需不需要做纯化?
A:不需要做纯化,离心取上清(选做);没有比较鼠趾还是鼠尾的效果好,一般都是用鼠尾。