1. 核酸助沉剂概念及作用
荧光定量PCR是分子诊断主流技术，包括核酸提取和PCR扩增两个环节，两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看，只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下，检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限，对于荧光定量PCR而言，即一定样本浓度下的病毒核酸检出率。
Carrier RNA，中文名载体RNA，又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节，提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料，管壁上有静电，会吸附核酸。在提取纯化过程中采用Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应，保证核酸能很好被吸附到纯化柱上，提高洗脱效率，从而达到尽可能多的回收样本中核酸！
2. 核酸助沉剂常见类型
作为核酸沉淀的辅助物质，核酸助沉剂有多种类型。
|
类型 |
代表物质 |
作用原理 |
|
多聚糖 |
糖原 |
RNA在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低，通过高速离心可发生沉淀。当RNA浓度很低时，微量RNA不足以形成沉淀。在上述环境条件下，糖原也不可溶并可与RNA共沉淀，形成可视化沉淀。 |
|
核酸混合物 |
PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等 |
减少吸附损失，降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。 |
|
其他 |
线性化丙烯酰胺 |
减少吸附损失 |
3. 产品介绍——上海翌圣生物生产的核酸助沉剂
翌圣生物Carrier RNA是酵母来源的RNA，无DNase、RNase酶残留，蛋白和DNA残留含量极低。可用于病毒核酸提取、微量DNA提取等实验，提取的核酸可用于后续RT-PCR，RT-qPCR等实验。产品分为液体和冻干型粉末制剂，便于直接使用和长距离运输、保存。
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
保存条件 |
|
Carrier RNA, 6 μg/μL |
19701ES03 |
1 mL |
-20℃保存，可保存2年 |
|
Carrier RNA Powder, 216 μg/tube |
19703ES01 |
1 tube |
室温保存，可保存1年 |
|
Carrier RNA Powder, 310 μg/tube |
19704ES01 |
1 tube |
室温保存，可保存1年 |
本品为核酸混合物，产品使用非常简单，在纯化核酸过程中通过添加微克量（μg）的Carrier RNA，即可实现提升低至皮克级别（pg）微量核酸的沉淀效率，达到提升试剂检测灵敏度的目的。
其作用原理主要是通过混入大量核酸（Carrier RNA），减少了目标核酸物质的管壁吸附损失，进而提高微量的核酸纯化柱上的结合和洗脱效率，同时降低了提取环境中的RNase降解微量RNA的概率。
4. 应用案例
Carrier RNA的加入有助于低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒（产品货号：19387ES），提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸，后续使用新 冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示，添加Carrier RNA后，具有更高的提取效率，使下游检测更灵敏。
|
Ct值 |
0 copies/mL |
125 copies/mL |
250 copies/mL |
500 copies/mL |
1000 copies/mL |
NTC |
|
不加carrier RNA |
N/A; N/A; N/A |
N/A; N/A; N/A |
N/A; 40.4; N/A |
N/A; 40.16; 40.88 |
38.05; 38.02 |
N/A; N/A; N/A |
|
加carrier RNA |
N/A; N/A; N/A |
N/A; 40.54; N/A |
40.2; 40.29; 38.95 |
38.61; 39.03; 38.59 |
37.53; 36.34 |
见图1-1
Carrier RNA放置于65℃不同时间（3d,6d,9d）后，与提取性能标准保存条件一致
将Carrier RNA粉末分别放置于65℃ 3d，6d，9d进行加速试验测试，测试方案为：使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒（产品货号：19387ES），提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸，后续使用新 冠检测试剂盒进行检测orf1ab和N基因。结果显示，与标准保存条件（-20℃）相比，置于65℃保存9天的Carrier RNA，性能不发生变化。定量仪器：Biorad CFX96，核酸提取仪：上海儒克生物 Purifier 32 核酸纯化仪。
VIC：
|
Ct值 |
0 copies/mL |
250 copies/mL |
500 copies/mL |
1000 copies/mL |
2000 copies/mL |
NTC |
|
65℃ 3天 |
36.32; 36.03; 36.26 |
35.16; 35.41; 39.26 |
35.19; 36.58; 35.44 |
33.80; 33.55 |
||
|
65℃ 6天 |
36.28; 35.61; 35.42 |
36.40; 35.21; 35.23 |
35.29; 34.37; 34.09 |
33.91; 33.21 |
||
|
65℃ 9天 |
36.40; 35.53; 37.41 |
36.24; 36.07; 36.63 |
34.34; 34.21; 34.25 |
33.97; 33.54 |
||
|
-20℃保存 |
N/A; 39.47; 39.86 |
36.40; 36.41; 38.01 |
35.55; 35.48; 36.01 |
33.14; 34.51; 34.50 |
33.92; 33.00 |
N/A; 40.15; 39.39 |
FAM：
|
Ct值 |
0 copies/mL |
250 copies/mL |
500 copies/mL |
1000 copies/mL |
2000 copies/mL |
NTC |
|
65℃ 3天 |
36.88; 37.07; 36.34 |
35.21; 35.62; 40.02 |
35.32; 36.61; 35.49 |
34.13; 33.86 |
||
|
65℃ 6天 |
35.98; 35.68; 35.32 |
37.34; 35.56; 35.39 |
35.69; 34.53; 34.14 |
34.35; 33.47 |
||
|
65℃ 9天 |
36.29; 36.20; 37.63 |
36.60; 35.86; 36.31 |
34.83; 34.41; 34.61 |
34.00; 33.58 |
||
|
-20℃保存 |
N/A; N/A; N/A |
36.06; 36.27; 39.08 |
35.63; 36.04; 37.43 |
33.5; 35.11; 34.49 |
34.09; 33.09 |
N/A; N/A; N/A |
见图2-1、图2-2
翌圣Carrier RNA V.S. Q同类产品
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒（产品货号：19387ES），提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸，后续使用新 冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示，添加Carrier RNA后，具有更高的提取效率，使下游检测更灵敏。
VIC：
|
Ct值 |
0 copies/mL |
125 copies/mL |
250 copies/mL |
500 copies/mL |
1000 copies/mL |
NTC |
|
YEASEN |
N/A; N/A; N/A |
N/A; N/A; N/A |
38.76; 38.47; 39.53 |
38.83; 37.60; 37.82 |
37.91; 37.17 |
N/A; N/A; N/A |
|
Q品牌 |
N/A; N/A; N/A |
N/A; 40.01; N/A |
N/A; 39.57; N/A |
37.42; 39.06; 38.85 |
N/A; 36.04 |
FAM：
|
Ct值 |
0 copies/mL |
125 copies/mL |
250 copies/mL |
500 copies/mL |
1000 copies/mL |
NTC |
|
YEASEN |
N/A; N/A; N/A |
N/A; N/A; 38.06 |
38.92; 37.44; N/A |
35.71; 38.51; 36.36 |
35.31; 34.59 |
N/A; N/A; N/A |
|
Q品牌 |
N/A; N/A; N/A |
N/A; 38.85; N/A |
38.61; 36.75; 39.58 |
37.41; 36.43; 35.70 |
36.25; 35.79 |
见图3-1、图3-2
5、相关产品
Carrier RNA提供成管冻干粉及液体类型，可直接用于各类应用场景。
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
19701ES03 |
1 mL |
635.00 |
|
|
19701ES08 |
5 mL |
询价 |
|
|
19703ES01 |
1 tube |
75.00 |
|
|
19703ES80 |
100 tube |
询价 |
|
|
19703ES92 |
1000 tube |
询价 |
|
|
19704ES01 |
1 tube |
95.00 |
|
|
19704ES80 |
100 tube |
询价 |
|
|
19704ES92 |
1000 tube |
询价 |
HB201223
