“天下武功，唯快不破。”

                                        ——在分子诊断的赛道上，速度就是生命，简便就是王道。

一、背景介绍：传统核酸提取的“慢”与“繁”

在分子生物学和临床诊断领域，核酸（DNA/RNA）提取是下游PCR、测序等实验的第一道关卡，往往也是最耗时、最易出错的环节。

图1常规核酸提取流程示意图（图源网络，侵删）

传统的核酸提取方法（如酚氯仿法、硅胶柱法、磁珠法）虽然纯度高，但存在明显的痛点：

1. 步骤繁琐：裂解、结合、洗涤（2-3次）、洗脱，全程需10-15个操作步骤；
2. 耗时长：单批次处理通常需要30-60分钟；
3. 设备依赖：往往需要离心机、振荡器甚至自动化提取仪；
4. 成本高：耗材（柱子、磁珠）和试剂成本居高不下；
5. 交叉污染风险：开盖次数多，气溶胶污染风险大。

在POCT（即时检测）、大规模筛查（如突发公卫事件）、基层医疗及现场快检场景中，我们迫切需要一种能省去纯化步骤、直接释放核酸、兼容下游扩增的解决方案。

核酸释放剂（Nucleic Acid Release Reagent）应运而生，它让核酸提取从“复杂工艺”变成了“简单一步”。

二、技术应用：如何做到“一步到位”？

核酸释放剂是一种专为快速检测设计的裂解缓冲液。其核心设计理念是：“只裂解，不纯化，抗抑制”。

1. 作用原理

• 高效裂解：利用特殊的表面活性剂和离液盐，迅速破坏细胞膜/病毒包膜及核衣壳蛋白，释放核酸。
• 酶活保护：配方经过特殊优化，能瞬间灭活内源性核酸酶（RNase/DNase），防止核酸降解。
• 抗抑制兼容：这是最关键的技术壁垒。传统裂解液中的成分往往会抑制Taq酶活性，而优质核酸释放剂通过独特的缓冲体系，确保裂解后的样本无需洗涤去除杂质，可直接加入PCR/qPCR/RT-LAMP反应体系中，且不干扰聚合酶活性。

2. 核心应用场景

1）病毒快速检测：咽拭子、鼻拭子样本的直接裂解，用于新冠、流感、呼吸道合胞病毒等检测。

2）细菌/真菌快筛：菌落直接煮沸或室温裂解，用于病原鉴定。

3）动植物检疫：叶片、组织研磨液的直接扩增。

4）法医与食安：微量样本的快速前处理。

5）家庭自测（Home Test）：配合等温扩增技术，实现非专业人士操作。

• 核心优势：

快（5分钟内完成）、简（仅需1步混合）、省（无需昂贵耗材）、稳（抗干扰能力强）。

图2 核酸释放剂的应用场景及优势

三、常见实验步骤（实验方案）

以下以翌圣生物（Yeasen）为例，展示病毒拭子样本直接qPCR检测的标准流程：

实验前准备：

• 待测样本（咽/鼻拭子）
• Yeasen 核酸释放剂
• qPCR预混液（含耐热聚合酶）
• 恒温金属浴或水浴锅（可选，部分产品支持室温裂解）

操作流程（总耗时 < 5分钟）：

1. 样本采集与投入

将采集好的拭子头直接剪入或折断至含有 50-100 μL 核酸释放剂 的采样管中。

注：若是液体样本（如血清、培养液），直接取20-50 μL加入释放剂中。

2. 快速裂解

方案A（室温快裂）：剧烈涡旋振荡10-15秒，室温静置2-5分钟（适用于大多数病毒和革兰氏阴性菌）。

方案B（加热增强）：置于 95℃ 金属浴加热 3-5 分钟，然后立即冰浴或室温冷却1分钟（适用于革兰氏阳性菌、真菌或难裂解样本）。

3. 直接扩增

取 2-5 μL 裂解后的上清液（无需离心，若杂质过多可短暂离心取上清），直接加入 20 μL qPCR反应体系 中。

注意：裂解液在反应体系中的占比通常建议控制在10%-25%以内，具体视产品说明书而定。

4. 上机检测

直接放入qPCR仪运行程序，无需任何额外处理。

图3 核酸释放剂操作步骤示意图

• 关键注意事项：

兼容性验证：不同品牌的聚合酶对裂解液耐受度不同，建议使用配套的“释放剂+酶”组合以获得最佳灵敏度。

避免过度稀释：裂解后直接取样，不要加水稀释，以免降低检测灵敏度。

保存条件：裂解后的样本若不能立即检测，建议短期4℃保存，长期-20℃冷冻（避免反复冻融）。

四、总结：重新定义核酸提取的速度

核酸释放剂的出现，不是对传统高纯度提取方法的替代，而是对快速检测场景的完美补充。它将原本复杂的实验室操作简化为“加样 - 裂解 - 扩增”三步，极大地降低了检测门槛和时间成本。

在追求“早发现、早诊断、早治疗”的今天，核酸释放剂让分子检测走出了中心实验室，走进了社区、海关、农场甚至家庭。它不仅是试剂的革新，更是检测模式的变革。

选择一款高效、兼容性强、稳定性好的核酸释放剂，就是为您的快速检测产品插上了速度的翅膀。

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